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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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蛋白研究系列
修飾檢測(cè)試劑盒

免疫熒光技術(shù)-間接法

時(shí)間:2021/10/26閱讀:1986
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材料與儀器:

抗體
PBS 伊文氏蘭
顯微鏡


實(shí)驗(yàn)步驟:

1. 標(biāo)本固定后,PBS洗滌3x3 分鐘;

2. 滴加一抗,37 ℃40 分鐘或4 ℃過(guò)夜;

3. PBS洗3x3 分鐘;

4.  滴加熒光標(biāo)記二抗37 ℃,40 分鐘;

5.  PBS洗3x3 分鐘;

6.  0.1 %伊文氏蘭復(fù)染;

7.  PBS洗3x3 分鐘;

8.  緩沖甘油封片,鏡檢。


要點(diǎn):
1.種屬在進(jìn)行雙重免疫標(biāo)記時(shí),要選擇來(lái)源于兩種不同種屬動(dòng)物的一抗,如選擇來(lái)源于rabbit和mouse的抗體,二抗則用帶有不同熒光素標(biāo)記的,如抗rabbit或抗mouse二抗, FITC和Tex-Red;
2.孵育時(shí)間和溫度相同的兩種一抗可以同時(shí)孵育,然后加入相對(duì)應(yīng)的一抗的二抗進(jìn)行孵育,一抗孵育時(shí)間室溫至少需要16h,二抗孵育室溫不宜超過(guò)4h,選擇4℃孵育比較好,背景比較清晰,另外孵育時(shí)夏天特別注意室溫溫度;
3.抗體稀釋液通常第一抗體選擇1%牛血清白蛋白進(jìn)行稀釋,第二抗體選擇用0.01mol/L的PBS稀釋。



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