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深圳市安培生物科技有限公司
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DNA提取方法簡介

時間:2021/10/22閱讀:4264
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一、DNA提取方法簡介


1基因組DNA的提取

1.1、CTAB法

1.2SDS

1.3、其它

2非基因組DNA的提取

2.1、質粒DNA的提取

2.1.1、堿裂解法

2.1.2煮沸法

2.2線粒體、葉綠體DNA的提取

差速離心結合SDS裂解法

1、基因組DNA的提取


1.2SDS


SDS法原理


SDS是一種陰離子去垢劑,在高溫(5565℃)條件下能裂解細胞,使染色體離析,蛋白變性,釋放出核酸;
提高鹽(KAcNH4Ac)濃度并降低溫度(冰浴),使蛋白質及多糖雜質沉淀,離心后除去沉淀;
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提,反復抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA


SDSDNA提取緩沖液


 圖片


改良的SDS法


 圖片


水浴 60min, 其間緩慢搖動幾次。加入150ul 5mol/ LKac, 混勻冰浴15min 左右。

SDS法流程圖 (以動物組織為例)


圖片



1.3、其它

根據細胞裂解方式的不同有:

物理方式

玻璃珠法

研磨法

超聲波法

凍融法

化學方式

異硫氰酸胍法

堿裂解法

生物方式

酶法

根據核酸分離純化方式的不同有:

吸附材料結合法

 

 

硅質材料

 

高鹽低pH值結合核酸,低鹽高pH值洗脫。快捷高效。

陰離子交換樹脂

低鹽高pH值結合核酸,高鹽低pH值洗脫。適用于純度要求高的實驗。

磁珠

磁性微粒掛上不同基團可吸附不同的目的物,從而達到分離目的。

濃鹽法

利用RNPDNP在鹽溶液中溶解度不同,將二者分離

有機溶劑抽提法

有機溶劑作為蛋白變性劑,同時抑制核酸酶的降解作用

密度梯度離心法

利用不同內容物密度不同的原理分離各種內容物



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