血清沉淀是否會影響細胞生長？如何避免？

時間：2021/8/18閱讀：1815

血清沉淀是否會影響細胞生長？如何避免？

血清是細胞培養試劑中最基礎普遍的試劑之一，之前我們已經介紹過了有關特殊加工工藝血清的一些小知識（了解和認識胎牛血清，特殊加工工藝血清，您知道幾種？），那么今天我們將繼續了解有關血清沉淀與血清熱滅活的相關知識~

血清沉淀是否會影響細胞生長？如何避免？

血清沉淀

1. 血清沉淀是什么？

血清中經常會出現肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產生的原因有很多。主要有纖維蛋白（絮狀沉淀）、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘連蛋白、磷酸鈣（顯微鏡下小黑點沉淀）、膽固醇等。

●纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中，血清采集、過濾（3 次 0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

血清沉淀是否會影響細胞生長？如何避免？

▲ 纖維蛋白沉淀圖

●磷酸鈣（Calcium Phosphate）

這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現云霧狀渾濁。當血清在 37℃保存時，這種現象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點的存在。這些小黑點在布朗運動的作用下四處游動，常被誤認為是微生物污染。

●其他成分（Other）

血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。

2. 沉淀是如何形成的？

造成沉淀的主要原因是溫度的改變、熱滅活、反復凍融、長期儲存于2-8℃或者室溫。

3. 血清沉淀會影響細胞培養嗎？

我們在出廠前都會對血清進行一系列質檢測試，確保血清質量達到嚴格標準。血清測試和細胞培養經驗也表明，其沉淀成分不會影響血清作為細胞培養添加物的表現。這一點得到了眾多用戶和其他血清供應商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

磷酸鈣顆粒經常會被當成微生物污染而引發不必要的擔憂。一般情況下，當操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來是否繼續使用。但這樣會使沉淀進一步增多，反而會使血清更加渾濁，進而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到小黑點（磷酸鈣顆粒的布朗運動），更容易使人誤以為存在微生物污染。

為防止這類誤解的產生，我們不建議用戶培養血清來驗證是否存在污染，而是將血清直接接種在細菌培養基上進行培養，以觀察是否有細菌的增殖。并且，進行革蘭氏染色，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認是否存在微生物污染。

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4. 如何避免血清沉淀

●正確解凍

首先，應按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或37℃水浴解凍，則非常容易產生沉淀。在解凍過程中，請注意，應時不時緩慢搖晃血清瓶，可減少沉淀的產生。為避免反復凍融，建議您將血清分裝使用。

●使用和保存注意事項

血清沉淀很難預測和避免，出現沉淀后也無需擔憂，這并不會影響血清的品質。已知血清沉淀在以下條件下會有增多的可能：

1) 熱滅活；

2) 37℃培養；

3) 反復凍融；

4) 伽馬射線照射；

5) 2-8℃長期保存；

6) 長期保存于可自動化霜的冰箱中（溫度不穩定）；

●血清沉淀的形成機理多種多樣，具體的機理尚不十分明確。我們尚不能準確預測和控制血清沉淀的產生。目前市面上所有品牌的血清產品都存在沉淀現象，這一點可以在各品牌網站上關于沉淀問題的聲明上得到證實。

5. 有沉淀時如何處理？

我們建議您采用2000rpm離心5分鐘，取上清使用就好，比過濾方便，不需要另外準備濾芯和針筒，且不容易污染。

總結建議

血清產品中出現沉淀屬于正常現象，不會影響到血清的品質，對細胞培養也不會產生影響，大家可以放心使用，若不立即使用，血清應保存在-20℃以下。

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