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LNCaP clone FGC 人前列腺癌細胞
LNCaP【LNCaP】 | |
l 細胞鑒定 | STR鑒定已通過 |
l 細胞來源 | 國家資源庫 |
l 細胞背景 | 人前列腺癌細胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結針刺活檢中分離，該患者經確診為前列腺癌轉移。這株細胞對5-α-二氫睪酮(生長調節子和酸性磷酸脂酶產物)有響應。 |
l 培養條件： | 1) 準備： 1640 （推薦awcell-0002）; 優質胎牛血清10%; Glutamax（invitrogen 35050） 1%; Sodium pyruvate（invitrogen 11360070) 1 %; p/s 1% 2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。 |
l 注意事項：
| 培養注意事項： a. 需使用Corning的cellbind細胞培養瓶,貨號是3289 。 b. 這株細胞并不形成一致的單層，而是形成集落。傳代時如胰酶消化后細胞形成聚團，可以用滴管反復吹吸打碎。 c. 該細胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養基變酸。 生長很慢。 傳代后48小時內不應擾動。 d. 細胞封包、寄出時，多數細胞從培養瓶底分離，懸浮在培養基中。 收到后，在通常培養單層細胞的條件下培養24到48小時，以使細胞再貼壁。 此后可以換上新鮮培養液。 如果需要，培養瓶內容物可以收集，300g離心15分鐘，以適量培養液重懸并培養到一個單獨的培養瓶中。 1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。 3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。 4）運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。 |
l 運輸形式： | 低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。 常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 |
l 生物安全 | 1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。 |
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