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細胞學堂 | 從傳代到換液,養好22RV1

閱讀:1481      發布時間:2023-7-18
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22RV1是來自異種移植(在閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴型CWR22嫁接后復發的小鼠中連續傳代)的人前列腺癌上皮細胞系[1]。此細胞系表達前列腺特異抗原PSA。二羥基睪丸脂酮可輕微刺激細胞生長,經Western Blot檢測溶解產物與抗雄性激素受體抗體起免疫反應。EGF可刺激細胞生長,但TGFβ-1不能抑制細胞生長。該細胞在裸鼠中成瘤。近年來,研究表明22RV1產生高滴度的人類逆轉錄病毒XMRV(異嗜性小鼠白血病病毒相關病毒)。



細胞特性

圖片

形態

上皮樣細胞單層貼壁生長

倍增時間

~40 hours

抗原表達

前列腺特異性抗原(PSA)

表達標志物

雄激素受體

生長培養基

RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

 ? 

培養注意事項


1

該細胞有密度依賴,傳代比例不宜超過1:4;

2

細胞復蘇時需要離心去除DMSO,離心接入皿中,靜置兩天,保持培養箱環境穩定。凍存細胞復蘇最初階段,貼壁量少,成簇松散貼壁,但是最終細胞會變平,并且擴散成很好的單層,這個過程需要4-5天時間;

3


4


細胞凍存后復蘇成活率不高,推薦凍存液配比為90%血清+10% DMSO;

細胞生長緩慢,細胞只能生長到90%的匯合度。


傳代步驟


1

吸出原培養液;


2

加入2mL左右PBS,輕輕晃動培養瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄;


3

加入1mL左右胰酶,輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞;


4

放入培養箱消化,消化2- 3分鐘左右,顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓且自然脫落(細胞一定要徹-底消化下來,全程不要拍打培養瓶);


5

加入3mL含血清的培養基終止消化,輕輕/反復吹打細胞,在顯微鏡下觀察,細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液;;


6

收集細胞懸液離心,1000-1200rpm(250-300g)/min,3-5分鐘,離心完吸出上清丟棄;


7

加入新鮮培養基,吹打幾下混勻細胞即可,按需接種到新培養瓶,補足足量培養基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養;


8

檢查培養箱二氧化碳,溫度和水盤。


換液步驟

01

吸出舊培養基并沿培養瓶側邊(非培養細胞容器底部)添加新的培養基;

02

每2-3天換液一次;



傳代比例和頻次

細胞長滿80%后,按照1:2的比例傳代,2-3天可再次生長到80%;1:3傳代,再次長滿到80%需要3天以上的時間。


圖片

細胞正常生長圖片


圖片

ATCC圖片





[1] Sramkoski RM, Pretlow TG 2nd, Giaconia JM, Pretlow TP, Schwartz S, Sy MS, Marengo SR, Rhim JS, Zhang D, Jacobberger JW. A new human prostate carcinoma cell line, 22Rv1. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1999 Jul-Aug;35(7):403-9. doi: 10.1007/s11626-999-0115-4. PMID: 10462204.


[2] Knouf EC, Metzger MJ, Mitchell PS, Arroyo JD, Chevillet JR, Tewari M, Miller AD. Multiple integrated copies and high-level production of the human retrovirus XMRV (xenotropic murine leukemia virus-related virus) from 22Rv1 prostate carcinoma cells. J Virol. 2009 Jul;83(14):7353-6. doi: 10.1128/JVI.00546-09. Epub 2009 Apr 29. PMID: 19403664; PMCID: PMC2704771.





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