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原代細胞的取材基本要求介紹
原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究,如蛋白質組學、基因組學、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學研究等,還可應用于當今熱門的生物醫藥產業如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。
原代細胞的培養
原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養,此時的細胞保持原有細胞的基本性質,如果是正常細胞,仍然保留二倍體數。但實際上,通常把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。
常用的原代細胞的培養有組織塊培養和分散細胞培養。
組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上,加入培養基后進行培養。
分散細胞培養大致步驟為:
將動物組織從機體中取出離散成單個細胞(常用胰蛋白酶),置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌)。
原代細胞的質量取決于多個因素:組織、培養基、特別是它還與實驗人員分離組織的技術息息相關。如果你對分離組織不甚精通或者很難保證組織來源地穩定性,市售的原代細胞是一種不錯的選擇。
細胞系培養相當成熟且普遍,但有時會得到一些難以解釋的結果。想不想得到更多符合體內正常生理條件的數據?從細胞系轉向原代細胞,情況一定會有所好轉。原代細胞培養模擬了體內的狀態,能讓你獲得更多這樣的數據。
原代細胞的取材基本要求
(1)取材要注意新鮮和保鮮 新鮮組織易于培養成功,取材時應盡量在4~6h內能制作成細胞,盡快入箱培養,若不能即時培養,應將組織浸泡于培養液內,于4℃存放。若組織塊較大,應在清除表面血、壞死組織、脂肪和結締組織后,切碎于培養液內4℃存放,但時間不能超過24h.對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應加入含10%二甲基亞砜的培養基,按細胞凍存方式于液氮中冷凍保存。
(2)取材應嚴格無菌 所取標本材料應在無菌條件下進行,為了確保無菌,對所取材料若疑有污染的可能,應將所取組織在含高濃度抗菌素(400單位/mL)甚至加入適量的***或10%達克寧液的培養液內于4℃下存放2小時以上,再用PBS洗2~3次,以確保所取材料無菌。要用無菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養液(內含400單位/mL抗菌素)的小瓶等便于攜帶的物品來取材,所取材料應避免接觸有毒有害的化學物質,如碘、汞等。
(3)取材和原代細胞制作時,要用鋒利的器械,如手術刀或剃須刀片切碎組織,盡可能減少對細胞的機械損傷。
(4)要仔細去除所取材料上的血液、脂肪、壞死組織及結締組織,切碎組織時應避免組織干燥,可在含少量培養液的器皿中進行。
(5)原代細胞取材時要同時留好組織學標本和電鏡標本。對組織的來源、部位、包括供體的一般情況要做詳細的記錄,以備以后查詢。
(6)取材應注意組織類型、分化程度、年齡等,一般來講,胚胎組織較成熟個體組織容易培養,分化低的較分化高的組織容易生長,腫瘤組織較正常組織容易培養。取材時應盡量選用易培養的組織進行培養。