小鼠神經小膠質細胞概述和運輸保存說明
小鼠神經小膠質細胞是神經膠質形成的主要功能細胞。神經膠質出現在大腦發育早期向成熟階段轉化的過程中,當程序性細胞死亡時,或在大腦發育的過程中,中樞神經系統受損或受到病理損壞時,神經膠質可做為大腦的巨噬細胞。膠質細胞能在II類組織相容性復合體表達CD-4陽性T細胞時表達抗原,能進行Fc介導的巨噬作用,并且與造血細胞和巨噬細胞組織共享抗原。
小鼠神經小膠質細胞采用胰酶消化制備而來。細胞的培養采用公司產品小鼠神經小膠質細胞培養試劑盒(MouseBrainPrimaCell?:NormalNerveMicrogliaCatNo.3-4428)來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞(如脂肪細胞、纖維細胞等)的污染,同時保證質量的穩定。在技術部標準的操作流程下,小鼠神經小膠質細胞傳5代仍可以保持原代細胞的分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
小鼠神經小膠質細胞運輸和保存:
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。