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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: FITC標記抗體-改良法

時間:2021-10-19 閱讀:219
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PriCells: FITC標記抗體-改良法
        
試劑:
1. 0.01mol/L pH7.2 PBS配方。將NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g, 
溶于2000ml三蒸水中,調整pH至7.2;
2. 0.5mol/L pH9.0碳酸鹽緩沖液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5.3%)10ml 
加入0.5mol/L NaHCO3(4.2%)90ml中,充分混合后,調整pH至9.0;
3. 3%中碳酸鈉水溶液的配制。稱取1.5g無水正碳酸鈉充分溶解于50ml三蒸
水中即成;

方法與步驟:
1. 根據Marshall氏法高效價的抗人球蛋白兔免疫血清,分離球蛋白;
2. 用0.15 mol/L NaCl的鹽水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3緩沖液稀釋使每毫升內含抗體10mg,緩沖液為總量的10%;
3. 將以上溶液降溫至4℃,按蛋白:熒光素=50—80mg:1mg的比例加入異硫氰酸熒光素,在0—4℃下電磁攪拌12—14h;
4. 用半飽和硫酸銨將標記球蛋白沉淀分離,除去未結合的熒光素,再用緩沖鹽水透析,除去硫酸銨,最后用Nessler氏試劑測驗至隔夜透析之鹽水無氨離子及熒光色素為止;
5. 將制備好的熒光抗體加0.01%的疊氮鈉,分裝在1ml安培中,或凍干,或保存于4℃冰箱中可以用半年以上,也可于-20℃冰箱保存達2年以上;

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