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PriCells: 四乙基羅丹明標(biāo)記抗體﹠四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記抗體

時(shí)間:2021-10-19 閱讀:276
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PriCells: 四乙基羅丹明標(biāo)記抗體﹠四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記抗體
        
四乙基羅丹明標(biāo)記抗體:
1. 稱(chēng)取1g RB200及2g PCL5放在乳缽中于通風(fēng)櫥中研磨5min;
2. 加入10ml無(wú)水丙酮,不斷攪拌,5min后過(guò)濾,用濾液進(jìn)行標(biāo)記抗體。剩 
余部分吸附在濾紙上,于4℃干燥保存;
3. 量取一定量的濃度為20mg/ml的抗體,按1:1:1的比例分別加入等體積
的生理鹽水和0.5mol/L pH9.0的碳酸鹽緩沖液來(lái)稀釋抗體;
4. 再加入0.1ml的RB200溶液,邊滴加邊攪拌,在0—4℃中結(jié)合12—18h;
5. 用生理鹽水透析5—7h,經(jīng)葡萄糖凝膠G-50柱層析,除去游離熒光素,
分裝,保存于4℃?zhèn)溆茫?/p>

四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記抗體:
1. 量取10ml濃度為6mg/ml的IgG,加在濃度為0.1mol/L pH9.5的碳酸鹽緩沖液中透析過(guò)夜;
2. 將四甲基異硫氰酸羅丹明按每毫克IgG加入5—20μg的比例溶于濃度為1mg/ml二甲基亞砜中,取此溶液300μl,逐滴加入抗體溶液中,同時(shí)用電磁攪拌;
3. 在室溫中避光攪拌2h;
4. 把結(jié)合物移入直徑3cm,高30cm的Bio-Gel P-6層析柱,此層析柱已用0.01mol/L pH8.0的PBS平衡過(guò),流速為1.5ml/min;
5. 收集到的先流出的紅色結(jié)合物即為標(biāo)記抗體,分裝后于4℃保存?zhèn)溆茫?/p>


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