5
當(dāng)前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術(shù)文章>>PriCells: 原代細胞富爾根（Feulgen）反應(yīng)顯示DNA
PriCells: 原代細胞富爾根（Feulgen）反應(yīng)顯示DNA
PriCells: 原代細胞富爾根（Feulgen）反應(yīng)顯示DNA
基本原理：
顯示DNA的傳統(tǒng)方法是富爾根（Feulgen）反應(yīng)，切片先用稀鹽酸處理，DNA經(jīng)弱酸（1mol/L HCL）水解后，在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開，脫氧核糖的一端釋放出醛基，并在原位與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物。原理同PAS反應(yīng)，使細胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響，故染色具有DNA特異性。準(zhǔn)確的溫度和鹽酸濃度，適宜的水解時間是成功的關(guān)鍵。水解過度或不足均降低染色強度。
配制試劑：
1. 1mol/L HCL:將8.5ml濃鹽酸和91.5ml蒸餾水混合即得；
2. 0.5%亮綠水溶液；
染色步驟：
1. 取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細胞，用Hanks液漂洗三次；
2. 在卡諾（Carnoy）固定液中固定10min，然后蒸餾水洗三次；
3. 移入60℃濃度為1mol/L的HCL中靜置10min；
4. 用蒸餾水漂洗幾次；
5. 放入Schiff試劑中靜置30—60min，可隨時檢查顯色情況；
6. 用自來水沖洗5min；
7. 再用蒸餾水漂洗；
8. 不同濃度梯度乙醇溶液脫水；
9. 用二甲苯透明、樹膠封片；
結(jié)果：
原代細胞核內(nèi)DNA顯紫紅色，細胞質(zhì)呈綠色；