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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常大兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)

時(shí)間:2021-9-28 閱讀:166
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PriCells: 正常大兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)


實(shí)驗(yàn)材料:

1. 正常大兔主動(dòng)脈

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2

3. 消化液:0.125%胰蛋白酶,0.1%膠原酶Ⅰ

4. 細(xì)胞培養(yǎng)瓶(T25)

5. 手術(shù)刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷

6. 網(wǎng)篩(100目)

7. 離心管(15ml、50ml)



實(shí)驗(yàn)方法:

1. 處死大兔,分離出主動(dòng)脈,放入預(yù)冷的含雙抗的1×PBS(pH=7.2)反復(fù)清洗3次。以洗去表面血絲和粘膜;

2. 將清洗過的大動(dòng)脈剪成2.5~3cm的血管段,剝離外膜;

3. 將去外膜的血管段放入培養(yǎng)皿中,縱向剪開管壁,然后使內(nèi)膜朝上,用小刀片輕輕刮去內(nèi)膜細(xì)胞。加1×PBS洗滌中膜3次,將中膜剪成1mm3的組織塊;

4. 將組織塊移入50ml離心管中,加入適量0.1%膠原酶Ⅰ溶液,在37℃恒溫箱中消化1~3h,至組織塊成絮狀為止;

5. 1000r/min,離心5min,去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液,37℃水浴中攪拌消化5~10min。用含血清的培養(yǎng)基終止消化,吸管輕輕吹打2-3min,以得到分散的平滑肌細(xì)胞;

6. 過100目網(wǎng)篩,收集濾液,1000r/min離心5min,棄上清;

7. 加培養(yǎng)液重懸細(xì)胞、調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105個(gè)/ml,接種于培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

8. 兩天后第一次換液,之后每天換液一次;

9.PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

10.PriCells-原代平滑肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑

11.PriCells-原代細(xì)胞分離試劑盒

  12.PriCells-原代細(xì)胞鑒定試劑盒


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