PriCells: 人角質形成細胞的分離培養

實驗材料：

1. 早產兒或死亡胎兒的皮膚，也可用手術取下的成體皮膚

2. 1000000U/L中性蛋白酶，0.25%胰蛋白酶

3. MEM和HBSS混合液，添加20mmol/L HEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L鏈霉素和1.5g/L慶大霉素

4. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

5. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 取厚1.5mm的皮片，用4℃MEM和HBSS混合液沖洗獲取的皮膚材料3次。將皮膚置于培養皿中，用鑷子和眼科剪仔細分離皮膚和皮下組織，去除脂肪和疏松結締組織。

2. 將皮膚展評，用手術刀切成2-3mm2的小片，放入中性蛋白酶消化液中，4℃下消化15-20h，或37℃下消化2-4h。

3. 用無菌針頭和眼科鑷子分離真皮與表皮。表皮薄而透明，真皮厚且輕微腫脹的凝膠狀。

4. 將分離出的表皮塊用0.25%胰蛋白酶，在37℃下振蕩消化10-20min后，加入含10%胎牛血清的培養基終止消化。

5. 1500r/min分離心5min，吸去上清液，用培養液重新懸浮沉淀細胞，用吸管輕輕吹散細胞，細胞計數。

6. 調整細胞密度至1.5×105個/ml，植于塑料培養皿培養，也可與滋養層細胞共同培養。當細胞生長覆蓋至培養皿底壁面積的70%-80%時，可進行傳代培養。

7. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

8. PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

9. PriCells-原代細胞分離試劑盒

10. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒