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人外周血白細胞的分離
正常人外周血白細胞的分離
一、自然沉降法
正常人外周血紅細胞與白細胞的比例約為6000～1000:1，兩類細胞的沉降速度不同，進行正常人外周血白細胞分離。
1、試劑及配制
1）無Ca2+、Mg2+ Hank’s液。
2）含10%～20% 滅活小牛血清Hank’s液。
2、操作方法
1）取靜脈血2ml，放入加有抗凝劑的試管中，輕輕混勻。
2）將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30～60min，待紅細胞自然沉降。此時可見試管中的懸液分3層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細胞，在緊貼紅細胞層上有一呈灰白色的白細胞層（正常人外周血白細胞）。
3） 用毛細管吸取位于紅細胞層上面的富含白細胞的細胞懸液，移入另一試管中；
4） 加入無Ca2+、Mg2+Hank’s液至離試管口3cm處，混勻，以水平離心機2000r/min 離心10min，棄上清，同法在洗滌兩次。
5）沉淀細胞用適量10%～20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸，計數，配成所需的細胞濃度的懸液，一般常用2×106/min。
二、加速紅細胞沉降法
利用高分子量的聚合物促使紅細胞凝聚成串錢狀，從而加速紅細胞沉降，使之與白細胞分離。常用的高分子聚合物有明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纖維素等。
1、試劑及配制
1）3%明膠（粘度為25泊以上）：選取優(yōu)質明膠，用生理鹽水配成3%溶液，置沸水浴加熱溶解，分裝，高壓蒸汽滅菌8磅15～20min。
2）6%右旋糖酐（分子量200～400KD）：用生理鹽水配制。
2、操作方法
1）取抗凝靜脈血加入等量3%明膠鹽水或6%右旋糖酐溶液中，混勻。
2）將試管直立靜置室溫或37℃溫箱中30～60min，利用明膠與紅細胞的粘合作用，促使紅細胞快速下沉，而白細胞留在明膠溶液中。
3）用毛細吸管吸取富含白細胞的上層液，移入另一試管中。
4）加入無Ca2+、Mg2+Hank’s液至離試管口3cm處，混勻，以水平離心機2000r/min 離心10min，棄上清，同法在洗滌兩次。
5）沉淀細胞用適量10%～20% 滅活小牛血清的Hank’s液重懸，計數，配成所需的細胞濃度的懸液，一般常用2×106/min。
三、正常成人白細胞正常值
1、白細胞數值
成年人外周血液中正常的白細胞數值是4～10×10g/L，如果少于4×10g/L為白細胞減少，超過10×10g/L及為白細胞增多。
正常值范圍：（單位為×109個/L）
（1）成人為4.0-10.0
（2）新生兒為15-20
（3）6個月到2歲為11-12
（4）4到14歲為8
2、白細胞分類計數
在外周血液中可以看到的白細胞，一般可分：中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞等五種。其中以中性粒細胞最多，其次為淋巴細胞，其他的白細胞很少。所謂白細胞分類計數就是計算各種白細胞在它的總數中所占的百分比數。
正常值為：中性粒細胞：50～70%
嗜酸性粒細胞：0.5～5%
嗜堿性粒細胞：0～1%
淋巴細胞：20～40%
單核細胞：1～8%