1、選用生長情況好，數量較多的原代細胞，凍存前一天換液一次。
2、貼壁細胞需用0.25％胰酶常規消化將細胞消化下來，將細胞懸液收集至離心管中。
3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。
4、沉淀加含DMSO的培養液，計數，調整至（1-10）×10⁶/ml。
5、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。
6、密封凍存管，封口一定要嚴，否則復蘇時易出現爆裂。
7、用記號筆標明細胞種類，凍存日期。
8、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（－80℃過夜）→液氮。

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