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SNL-008-BHK-21(倉鼠腎成纖維細(xì)胞)
  • SNL-008-BHK-21(倉鼠腎成纖維細(xì)胞)
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貨物所在地:湖北武漢市

地: 武漢東湖高新區(qū)高新大道858號(hào)

更新時(shí)間:2024-12-17 15:16:57

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BHK-21(倉鼠腎成纖維細(xì)胞)的親本細(xì)胞株是由I·A:Macpherson和M-G-P-Stoker于1961年3月從1日齡的倉鼠建立的。隨后84天連續(xù)培養(yǎng),僅中斷8天進(jìn)行凍存,通過單細(xì)胞分離建立了13號(hào)克隆,即BHK-21。BHK-21 [C-13]細(xì)胞可用作轉(zhuǎn)染宿主,用于表達(dá)包含選擇及擴(kuò)增標(biāo)記的DNA的載體。

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞別稱:BHK-21(倉鼠腎成纖維細(xì)胞)
細(xì)胞別稱:BHK-21
細(xì)胞貨號(hào):SNL-008
細(xì)胞種屬:倉鼠
生長(zhǎng)情況:貼壁
培養(yǎng)條件:EMEM(MEM+NEAA)+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定)
傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s,吸走潤(rùn)洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰酶,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層;
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
5.消化到細(xì)胞間隙變大,但未*脫落時(shí)加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化;
6.混勻細(xì)胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
8.補(bǔ)足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項(xiàng):不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大,注意嚴(yán)格控制消化時(shí)間
消化傳代細(xì)胞時(shí)吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:
1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞;
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
Tips:
1.細(xì)胞細(xì)長(zhǎng)梭形生長(zhǎng),貼壁較弱,消化時(shí)間較短,注意控制消化時(shí)間;
2.注意控制傳代密度,密度過低時(shí)會(huì)生長(zhǎng)緩慢;

我們推薦使用尚恩生物BHK-21(倉鼠腎成纖維細(xì)胞)*培養(yǎng)基(產(chǎn)品貨號(hào):SNLM-008)作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

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