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武漢尚恩生物技術有限公司

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人乳腺癌細胞MCF-7的復蘇實驗流程

閱讀:1517      發布時間:2021-04-08
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人乳腺癌細胞MCF-7保留了多個分化了的乳腺上皮的特性,包括:能通過胞質雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復合物。MCF7 [MCF-7]細胞含有Tx-4癌基因;腫瘤壞死因子c可以抑制MCF7 [MCF-7]細胞的生長,抗雌激素處理MCF7[MCF-7]細胞能調變IGFBP'S的分泌。

1.實驗目的
恢復凍存的細胞的活性。
2.實驗原理
在實際操作中,凍存細胞要進行復蘇,再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細胞內,再次形成胞內結晶損傷細胞。
3.實驗材料
①儀器:CO2培養箱、倒置顯微鏡、超凈臺、離心機、37℃水浴鍋。
②材料:于液氮中保存的人乳腺癌細胞MCF-7細胞凍存管、培養瓶、離心管、移液管,巴斯德吸管、廢液缸、75%酒精棉球、酒精燈、記號筆、鑷子、滅菌細胞培養瓶。
③試劑:RPMI1640*培養基。
4.操作步驟
(1)實驗前準備
①將水浴鍋預熱至37℃,將培養液預熱后分裝到培養皿中。
②離心管、吸管、培養瓶等。
(2)取出凍存管
①根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
②從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
(3)迅速解凍
①迅速將凍存管投入已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷地搖動,使管中的液體迅速融化。
②1~2 min后凍存管內液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
(4)制備細胞懸液
①將復蘇細胞直接轉入已添加培養基的培養瓶內,置于37℃,5%CO2培養箱中繼續培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)。
②第2天(在細胞貼壁生長24 h前),用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
我們推薦使用尚恩生物MCF7 [MCF-7](人乳腺癌細胞)*培養基(產品貨號:SNLM-060)作為體外培養MCF7 [MCF-7](人乳腺癌細胞)的培養基。

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武漢尚恩生物技術有限公司

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