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毛細(xì)管電泳分析對進(jìn)樣技術(shù)有哪些要求?

閱讀:1883      發(fā)布時間:2021-5-17
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電泳儀:專為進(jìn)行電泳提供外加電場的直流電源,其輸出電壓或電流或功率要求相對穩(wěn)定或按特定規(guī)律變化。常用的電泳分析方法主要有:醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳、毛細(xì)管電泳。其中,毛細(xì)管電泳分析對進(jìn)樣技術(shù)要求很高,進(jìn)樣操作事項(xiàng)如下:

1、進(jìn)樣區(qū)帶越小越好:

    無論采用何種進(jìn)樣方式,毛細(xì)管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細(xì)管總長度的1%~2%,以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細(xì)吸附進(jìn)入毛細(xì)管而影響進(jìn)樣量的性。樣品管中溶液少為5μL,進(jìn)樣體積為1~50nL。

2、進(jìn)樣時間以短為宜:

    通常進(jìn)樣時間為0.5~1s,此時毛細(xì)管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計(jì)。
 雖然毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣時間可至±0.1s,但由于毛細(xì)管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液,進(jìn)樣時間過短會影響分析的重復(fù)性。

3、樣品預(yù)濃縮:

    受毛細(xì)管內(nèi)總體積的制約,對于濃度很稀的樣品,毛細(xì)管電泳不能象HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來提高檢測靈敏度,但可采取一些措施來改善。
 * 當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)明顯低于(100倍以上)電泳緩沖液時,毛細(xì)管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場,使樣品溶液中的分子遷移的更快。當(dāng)這些分子到達(dá)電泳緩沖液邊界時,由于電場減弱,遷移速度減慢,使樣品區(qū)帶由寬變窄,濃度提高,而達(dá)到濃縮的目的。
 * 當(dāng)樣品緩沖液和電極緩沖液的電導(dǎo)一樣,而樣品濃度較稀,不適合再作稀釋時,可在進(jìn)樣前先吸入一些水,也能達(dá)到濃縮的目的。
    無論采取何種進(jìn)樣方式,上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降,會導(dǎo)致此區(qū)帶溫度升高。

4、毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。

5、電極不要和毛細(xì)管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。

6、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度,而影響進(jìn)樣量的恒定。

7、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。

8、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。



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