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上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法

閱讀:1210          發布時間:2019-7-18

                               上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法

 

每當暑假一到,我都會很高興.想到有兩個月的時間可以不用上課,那簡直就是一年當中美好的時光了.  每當暑假一到,我都會很高興.想到有兩個月的時間可以不用上課,那簡直就是一年當中美好的時光了. 小編接下來介紹 兔ELISA試劑盒操作及保存方法

 

樣品收集、處理及保存:

 

  1、細胞培養上清:適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

 

  2、細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104

 

  -106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

 

  3、血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

 

  4、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上

 

  清。

 

  5、體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

 

  6、組織標本:切取組織標本,稱取重量0、5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000

 

  rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

 

  7、樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

  8、保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

  兔ELISA試劑盒操作步驟:

 

  1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

 

  2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

 

  3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 

  4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

 

  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

 

  6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

 

  7、溫育:操作同3。

 

  8、洗滌:操作同5。

 

  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

 

  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

 

  11、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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