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生化鑒定條使用注意事項及討論

閱讀:93          發布時間:2025-5-15

  生化鑒定條作為成套生化管的升級產品,以其快速、簡單、操作方便的優勢,受到廣大用戶的好評。我公司目前有各種生化鑒定條出售,滿足不同客戶的需求(產品目錄和信息參考:HBI微生物生化鑒定條 )。但在實際使用過程中,經常會碰到一些疑問或問題,本文將對有關問題進行解釋和討論。


1、做生化鑒定前一定要進行純化嗎?

  對單一菌種進行鑒定,不需要進行純化操作,只需要保證菌體新鮮就行。但對于在選擇性培養基上分離出的菌,最好進行純化后在進行鑒定。原因如下:

  (1)選擇性培養基上初步分離的菌落,不一定是單一菌種形成的,若有其它菌種,會干擾試驗結果,造成誤判;

  (2)選擇性培養基成分復雜,挑菌時若沾取了少量培養基,有可能會對鑒定結果造成干擾;

  (3)選擇性培養基中通常含有一些抑制成分,平板上長出的菌落會受到不同程度的抑制或損傷,活力不好,不利于生化結果的觀察和判定;

  (4)選擇些平板上長出的菌落通常較小,若需要做很多生化試驗,有可能出現菌體不夠用的情況(通常每挑一下接種后,要進行燒環滅菌再進行下一次挑菌,浪費較多)。

  上面兩種情況,無論是為了得到新鮮菌體,還是為了得到較純的菌落,都需要在營養瓊脂平板上進行劃線培養。所以這是菌種生化鑒定前首先要做的準備工作,直接使用初篩菌,試驗結果可能會有一些差異,造成誤判(如圖1)。

使用純化菌(左)和初篩菌(右)接種鑒定條培養結果的差異

圖1 使用純化菌(左)和初篩菌(右)接種鑒定條培養結果的差異


2、接種鑒定條時,一定要用菌懸液來接種嗎?

  鑒定條說明書中要求“取一內盛2mL無菌水或無菌生理鹽水試管,用接種針挑取純化菌落至無菌水中仔細研磨制成0.5麥氏濁度的均一細菌懸液,每孔滴入100mL菌懸液,其中固體和半固體生化管采用穿剌接種(參考:HBI微生物生化鑒定條 )"。也就是說要用均勻的菌懸液進行接種。這樣要求,是為了盡量使每個孔中接入的菌量相當,使各生化反應趨于同步。如果使用接種針或接種環直接挑菌進行接種,會導致各個孔中接菌量差別很大,從而導致培養結果有所差異(如圖2-a、圖2-b)。

用菌懸液接種的試驗結果(氨基酸對照管變黃,正確)

圖2-a  用菌懸液接種的試驗結果(氨基酸對照管變黃,正確)

用接種環挑菌接種的試驗結果(氨基酸對照管紫色,異常)

圖2-b  用接種環挑菌接種的試驗結果(氨基酸對照管紫色,異常)


3、需要每個孔都換槍頭嗎?

  接種過程中,如果能保證每次往培養基孔中滴加菌液時,不會沾染槍頭,則從頭到尾用一個槍頭即可;如果中間出現沾染,則需及時更換槍頭;對于氨基酸和氨基酸對照孔,盡量不用同一個槍頭,以免少量的沾染,影響試驗結果。有的人會執意用接種針挑取菌體進行接種,這時候更要注意,每接種一個孔,都要進行燒環滅菌,主要是為了清除接種針或接種環上沾附的少量培養基,以免對后面孔的試驗結果造成干擾。堅決不能用一個針挑取菌苔后,連續往鑒定條的每個孔中一次性接種完成。這樣很可能造成生化結果的混亂或者試驗失敗。


4、討論:

  對于菌種純化,有些標準中也有描述,可以從選擇性培養基平板上挑菌進行某項生化試驗,如《GB 4789.4  食品安全國家標準  食品微生物學檢驗  沙門氏菌檢驗》中相關內容是這樣描述的:

  但是為了保險,少走彎路,本人還是建議先進行純化后,制成菌懸液再進行接種、培養。這樣也不會因為某一兩個孔的結果不好,而再重新使用一整套生化鑒定條,造成浪費。文中所列的幾種異常情況,不一定每次都能碰到,但是如果不按正常操作進行試驗,試驗過程中出現各種這樣或那樣異?,F象的幾率會更大,阻礙試驗進程。

  另外,為了保證結果的一致性和實效性,可以將菌液制備得盡量濃一些,也就是說每個孔中接菌量可適當加大。




注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。



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