1. 概要

    赭曲霉毒素Ａ由 Aspergillus 和 Penicillium 兩類霉菌產生，除明顯的腎毒性外，赭曲霉毒素A還表現出肝毒性、致畸性、致癌性和免疫抑制性等特性。對人體健康而言，危害不僅來源于污染的植物性食品，也通過動物性食品的攝入。我國規定谷物、豆類及其制品中赭曲霉毒素A不得超過5μg/kg，歐盟規定谷物、豆類及其制品中赭曲霉毒素A不得超過3μg/kg。

1. 原理

測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有抗抗體。加入赭曲霉毒素A（OTA）標準品或樣品、酶標抗原和抗體后，游離的赭曲霉毒素A與酶標抗原競爭結合抗體，抗體或抗體結合物與固定在微孔板上的抗抗體再結合，沒有結合的標準品、酶標抗原及抗體被洗去，加入TMB底物顯藍色，加入終止液后顏色由藍變黃，用酶標儀在450nm處檢測，吸光值與樣品中赭曲霉毒素A含量成負相關，與標準曲線比較即可得出赭曲霉毒素A的含量。

 
3. 試劑盒組成

1. 包被有抗抗體的96微孔板：1塊（96孔，12條×8 孔）
2. OTA標準品：0 ppb、0.2 ppb、0.8 ppb、3.0 ppb、10 ppb                    1 瓶 × 1.0mL
3. OTA抗體：                1 瓶 × 10mL
4. OTA酶標抗原：            1 瓶 × 10mL
5. 10× 濃縮洗滌液：          1 瓶 × 50mL
6. OTA稀釋緩沖液：          1 瓶 ×50mL
7. 顯色底物液：              1 瓶 ×17mL
8. 反應終止液：              1 瓶 × 7mL
9. 試劑盒說明書
10. 質檢報告

1. 需要的儀器、試劑

1）儀器   

1. 酶標儀450nm（iELisa全自動酶標儀或相當者）
2. 微量移液器：20μL-200μL單道，100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
3. 多功能旋轉混合器（或者搖床、高速均質器）
4. 酶標板振蕩器
5. 渦旋混合器
6. 50mL離心管
7. 1.5mL離心管
8. 定性濾紙
9. 過濾漏斗
10. 天平：感量0.01g

2）試劑

1. 樣品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL純水，混勻。
2. 純水（蒸餾水、去離子水）

8.  注意事項

1. 室溫低于20℃或試劑及標本未回到室溫（20- 25℃）會導致數值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現板孔干燥過久的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板排干后應立即進行下一步操作。
3. 標準物質和顯色液對光敏感，避免直接暴露在光線下。
4. 混合要均勻，洗板要*（包括加樣品和標準液的時候都必需充分混合均勻）。
5. 反應停止液為強酸性物質，避免接觸皮膚。
6. 不要使用過了有效期的試劑盒，也不要稀釋或攙雜使用不同生產廠家的試劑盒這樣會引起靈敏度降低。
7. 試劑盒的儲存條件是2-8℃，切勿冷凍。

9.  檢測方法靈敏度、準確度、精密度

1. 檢測限LOD: 谷物1ppb（μg /kg），飼料2.5ppb尿液1.0。（LOD：空白樣品測定值+2倍標準偏差SD）
2. 定量限LOQ: 谷物2ppb，飼料5ppb,尿液1.5ppb。
3. 定量檢測范圍：谷物2-50ppb，飼料5-125ppb,飼料1.5-25ppb。