1. 概要

iELisa玉米赤霉烯酮檢測試劑盒利用競爭性酶聯(lián)免疫反應原理，對玉米、麥類、豆類、大米等谷物和飼料中玉米赤霉烯酮的含量進行定量檢測。玉米赤霉烯酮是由鐮刀菌類的真菌形成，它是一種植物性激素，并具雌激素性特征。玉米赤霉烯酮具有較強的生殖毒性和致畸作用，可引發(fā)動物發(fā)生雌性激素亢進癥，導致動物不孕或流產(chǎn)，對家畜特別是豬、牛和羊的影響較大。中國標準規(guī)定：玉米、小麥中玉米赤霉烯酮不得超過60μg /kg，配合飼料、飼料原料玉米中玉米赤霉烯酮不得超過500μg /kg。

1. 原理

測定的基礎是抗原-抗體反應。微孔板上包被有抗抗體。加入玉米赤霉烯酮（ZEN）標準品或樣品、酶標抗原和抗體后，游離的玉米赤霉烯酮與酶標抗原競爭結(jié)合抗體，抗體或抗體結(jié)合物與固定在微孔板上的抗抗體再結(jié)合，沒有結(jié)合的標準品、酶標抗原及抗體被洗去，加入TMB底物顯藍色，加入終止液后顏色由藍變黃，用酶標儀在450nm處檢測，吸光值與樣品中玉米赤霉烯酮含量成負相關，與標準曲線比較即可得出玉米赤霉烯酮的含量。

1. 試劑盒的組成

1. 包被有抗抗體的96微孔板：1塊（96 孔，12 條×8 孔）
2. 玉米赤酶烯酮標準品：0 ng/mL 、1.0ng/mL、5.0ng/mL、15.0ng/mL、50.0ng/mL；              1 瓶 × 1.0mL
3. ZEN酶標抗原：             1 瓶 ×10mL
4. ZEN抗體：                 1 瓶 × 10mL
5. 10× 濃縮洗滌液：           1 瓶 × 50mL
6. ZEN稀釋緩沖液A：          1 瓶 × 50mL
7. ZEN稀釋緩沖液B：          1 瓶 × 50mL
8. 10倍濃縮洗滌液             1 瓶 × 50mL
9. 顯色底物TMB：             1 瓶 × 17mL
10. 終止液：                   1 瓶 × 7mL
11. 試劑盒說明書：             1份
12. 質(zhì)檢報告：                 1份

1. 需要的儀器、試劑

1）儀器   

1. 酶標儀450nm（iELisa全自動酶標儀或相當者）
2. 微量移液器：20μL-200μL單道，100μL-1000μL單道, 50μL-300μL八道
3. 多功能旋轉(zhuǎn)混合器（或者搖床、高速均質(zhì)器）
4. 酶標板振蕩器
5. 渦旋混合器
6. 50mL離心管
7. 1.5mL離心管
8. 定性濾紙
9. 過濾漏斗
10. 天平：感量0.01g

1. 試劑

1. 樣品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL純水，混勻。
2. 純水（蒸餾水、去離子水）

試劑盒的性能指標

1. 檢測限LOD: 谷物5ppb（μg /kg），飼料50ppb(15ppb),尿液3.0ppb，植物油5ppb（μg /kg）。（LOD：空白樣品測定值+2倍標準偏差SD）
2. 定量限LOQ: 谷物10ppb，飼料100ppb(20ppb),尿液5.0ppb，植物油20ppb。
3. 定量檢測范圍：谷物10-1000ppb，飼料100-5000ppb（20-1200ppb）, 尿液5-250ppb，植物油20-1000ppb。