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北京中檢維康生物技術有限公司

食品及飼料中伏馬毒素的檢測-柱前衍生及柱后衍生法

時間:2023-12-4 閱讀:2411
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? 關于伏馬毒素  ?

   伏馬毒素 (Fumonisin FB) 是一種霉菌毒素,是由串珠鐮刀菌產生的代謝產物。主要污染糧食及其制品,并對某些家畜產生急性毒性及潛在的致癌性,已成為繼黃曲霉毒素之后的又一研究熱點。目前我國現行標準《食品安全國家標準食品中真菌毒素XIAN量》(GB2761-2017)尚未涉及伏馬毒素的XIAN量,不過在《飼料衛生標準》(GB 13078—2017)規定了部分飼料原料和飼料產品中的FB1和FB2總量的XIAN量標準。其中飼料原料玉米及其加工產品、玉米酒糟類產品、玉米青貯飼料和玉米秸稈中伏馬毒素的XIAN量為 60 mg/kg,其他飼料產品中伏馬毒素的XIAN量在5~50 mg/kg。

? 關于檢測方法?

GB 5009.240-2023 食品安全國家標準 食品中伏馬菌素的測定 (將于2024年3月實施)

LS/T 6130-2017 糧油檢驗 糧食中伏馬毒素B1、B2的測定 超高效液相色譜法

本方案采用IAC-107伏馬毒素免疫親和柱

IAC-107伏馬毒素免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的伏馬毒素B1 、B2 、B3 . 伏馬毒素免疫親和柱廣泛地應用于糧食、食品、飼料、等樣品的提取,該方法速度快、操作簡單、準確性高,對準確靈敏的測定樣品中的伏馬毒素起到十分重要的作用。

? 操作流程?

一、樣品前處理

1.樣品提取及稀釋


1.1 取25.0g(精確到0.1g)過篩樣品于均質杯中,加入乙腈水(5+5) 100mL,以均質器高速攪拌提取2min或振蕩提取20min,定量濾紙過濾。


1.2 移取2.0mI濾液加入48mL0.1%的吐溫/PBS稀釋混勻。


2.樣品凈化


2.1將免疫親和柱連接于玻璃注射器下準確移取50.0mL上述樣品溶液注入玻注射器中。

2.2將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約1滴/s的流速緩慢通過免疫親和柱,直至空氣進入親和柱中。

2.3用10mL水淋洗親和柱流速為1滴/s~2滴/s.直至空氣進入親和柱中,棄去全部流出液,抽干小柱。

2.4準確加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脫流速約為1滴/s,收集洗脫液。50°C下氮氣濃縮吹干后,用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL,待檢測。

二、液相條件及衍生方法

柱前衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 體積比)用磷酸將PH值調到3.3

檢測器: 激發波長335nm 發射波長440nm

進樣體積: 20uL

衍生方法:取100uL標準溶液或樣品凈化液于進樣瓶中加入100uL OPA衍生試劑A渦旋混合30s,在 2分鐘內進樣分析。

柱后衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動相: 甲醇/(65+35)

檢測器:激發波長335nm發射波長440mm

進樣體積: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生溫度: 50℃

衍生泵流動相: OPA行生試劑B

圖片  

HP-L10柱后衍生系統  

圖片

HP-L20柱后衍生系統

? 實驗結果?

1、效回收:



圖片

2、樣品添加回收:取玉米樣品,伏馬B1B2B3混標添加各1000ppb

圖片

3、標準品及樣品圖譜

圖片

1  柱前衍生標準品液相色譜圖(出峰順序B1,B3,B2)

圖片

2  柱后衍生標準品液相色譜圖(出峰順序B1,B3,B2)

圖片


3  玉米本底液相色譜圖
圖片      圖4  玉米加標液相色譜圖
? 訂購信息?
本方案所需要的產品及儀器見下表


C/N編號

物品

HP-L10

HP-L20

CLOVER柱后衍生裝置

C1015

鄰苯二甲醛 (HPLC 法用)

C1016

2-疏基乙醇(HPLC 法用)

ZJ0612

科樂福 CLOVER 多位位泵流操作架(配有1臺空氣泵,610mL 針簡)

20202

高速勻質器,轉速可達 18.000 r/in~22.000 r/min

31955-C

科樂福 CLOVER微纖維濾紙   (1.5um100 /)

31240-C

折疊式槽紋濾紙 (100 /),或中速定性濾紙

36010-C

一次性塑料燒杯(25/)

34000-C

一次性無熒光測試管(250 /)

36020-C

塑料漏斗(10 /)

CLOVER-1ST7224/5/6

伏馬毒素標準品 B1/B2/B3

35016

色譜純級的甲醇(4/)

C546150-U

科樂福 Cloversil C18 反相色譜柱 4.6*150mm (5um)

C546250-U

科樂福 Cloversil C18 反相色譜柱 4.6*250mm (5um)

FCMF3-CCP320C

玉米、飼料等基質含有不同水平伏馬毒素的質控樣品(FAPAS/Trilogy)



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