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體外藥代動力學研究

—熱點問題—

第一題    酶誘導的受試物濃度一般設置多少？如果體系待測物溶解度很差有沒有什么解決辦法？

酶誘導試驗需要設置3個不同的濃度，濃度水平需涵蓋預期人體內有效血藥濃度，最高濃度的選擇至少比平均的人體內的有效血藥濃度高一個數量級。如果在水相中溶解度很差，可以選擇有機溶劑作為其溶劑，如DMSO，但是需要控制有機溶劑在體系中加入量。

第二題    在酶誘導試驗中是否需要在酶活性和mRNA兩個水平上進行評估？

通常需要結合酶活性和mRNA兩個水平上的結果做結論，且mRNA水平更能真實反映誘導源頭上的效應，且更為敏感。僅測量酶活性主要存在問題是：當同時存在抑制作用時，可能會掩蓋誘導作用，而通過測量mRNA水平進行轉錄分析可解決該問題。且應通過陽性對照驗證系統，證明其中所有主要的CYP酶有功能且可被誘導。

第三題    酶誘導研究中，研究初期為什么只關注CYP1A2，CYP2B6 和 CYP3A4三個酶？

CYP誘導的根源是藥物與主要核受體的結合從而使相應的mRNA表達量增高，從而導致CYP酶表達水平的升高。其中，CYP3A、CYP2C的核受體是孕烷X受體（PXR），CYP1A2的核受體是多環芳香烴受體（AhR），CYP2B6的核受體是組成型雄烷受體（CAR），而CYP2D6則未發現可被誘導。若體外試驗未見對 CYP3A4 酶的誘導，則可不必再評價對 CYP2C 酶的誘導作用；若在研藥物體外研究結果顯示可以誘導 CYP3A4，且結果提示應進一步開展臨床試驗，則需評估其誘導 CYP2C 的可能性。

第四題    在誘導試驗中為什么要連續加藥誘導？

一般情況下促變藥應多次給藥直至其達到穩態后，再評價其對底物藥物的影響。若促變藥并非誘導劑或者時間依賴型抑制劑，并且可證明單次與多次給藥對酶/轉運體的影響相似時，可采用單次給藥進行 DDI 研究。

第五題    肝細胞代謝試驗中陽參藥物的代謝較參考數據慢很多，可以考慮哪些原因？

可能會有多種原因會導致該結果。首先，需要確認試驗過程是否存在問題，不同廠家的產品在使用上會存在或多或少的差異，我們需參照產品COA確認自己的試驗結果和廠家提供的數據是否存在差異。其次，確認肝細胞的質量是否達標，質量不好會直接影響試驗結果。質量的確認可以從復蘇存活率、維持狀態等多個方面進行考察。

第六題    請問本公司是否可承接原代肝細胞相關項目？

本公司有專業的技術人員和完善的分析檢測平臺，可承接原代肝細胞相關項目，如果感興趣可與我們商務人員對接。

第七題    什么情況下需要進行UGT表型研究？

體外或體內研究的數據顯示UGT酶是候選藥物的主要代謝酶時，需要考慮進行UGT表型研究。化學抑制法和重組酶法仍然是UGT酶表型研究的常用方法，但因UGT酶暫未篩選出較為全面的選擇性較強的抑制劑，重組酶法常為其常用方法，也是有效的方法。

第八題    酶抑制研究中什么時候測定Ki值？

當IC50＜1 μM時，強烈推薦進行Ki值測定；當IC50為1~10 μM之間，較為接近有效濃度時，也可以考慮測定Ki值。

第九題    是否需要評估化合物是否為時間依賴性抑制劑？

TDI是一種比可逆抑制帶來更嚴重的副作用的狀況，初步推薦單點法或2點法評估，高點可以為50×Cmax或劑量/250mL的0.1倍，一旦發現，則必須精確評估。

第十題    酶抑制試驗中，底物的消耗量為什么要小于20%？

通常情況下，酶抑制試驗我們會檢測產物的生成量，會盡量選擇相對高的底物濃度，且保證選擇的孵育時間點是在線性反應時間點內。如果底物濃度過低，有可能會很快達到平衡，從而導致結果判定有誤或難以判斷。

十一題    酶抑制研究中，是否可以用Cocktail探針底物法？

文獻和資料中提到，IND申報需要使用單底物法進行酶抑制研究的，篩選型研究可以使用cocktail探針法。

十二題    篩選階段酶抑制試驗可以不設置平行嗎？

建議試驗中設置平行，如果平行做不好，可能試驗系統問題存在。設置平行可確保組內精密度、準確度得到有效控制，也是試驗結果有效性的直接證據。 

十三題    體外代謝試驗需要設計很多對照組，請問對照組是必須的嗎？是否可以刪減？

對照組的目的是考察化合物本身在不同組分中的穩定性，對照組結果穩定是整個代謝試驗成立的前提條件。

十四題    化合物在有機溶劑中可以檢測到，但加入孵育體系后檢測不到？

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初步判定可能是化合物在水相中溶解度不好或者化合物在水相環境中易水解導致的。若是由于在水相中溶解度不好導致，可優化樣品前處理過程；若相同濃度化合物在水溶液和有機溶劑的響應相差50%以上，判定化合物易水解（0.1M PBS對某些化合物而言，可能存在基質效應，判定前需排除基質效應影響），不易進行體外代謝試驗，建議確認化合物發生藥效是化合物本身還是其水解產物。

十五題    有機溶劑的加入對試驗結果有什么影響？

孵育體系中有機溶劑的含量要控制在1%以內。孵育體系中發揮代謝作用的組分是酶，而酶的本質是蛋白，有機溶劑加入過多，會導致酶變性，活性降低或喪失，故孵育體系中要控制有機溶劑的加入量。