TGIRT™ Improved Modular Template-Switching RNA-seq Kit，

TGIRT™ Improved Modular Template-Switching RNA-seq Kit，描述：

該試劑盒包括TGIRT ^® -III 酶，一種 RNA 和 DNA 寡核苷酸的混合物，可以退火形成包含第一個(gè)接頭序列的 R2 RNA/R2R DNA 異源雙鏈體、二硫蘇糖醇 (DTT)和反應(yīng)緩沖液以執(zhí)行 TGIRT ^®模板-用于 Illumina RNA-seq 和 ssDNA-seq 分析的轉(zhuǎn)換反應(yīng)。^7,8,9,10,12該試劑盒能夠合成 RNA 模板的 cDNA 拷貝，第一個(gè) RNA-seq 接頭無縫連接到 cDNA 的 5' 端。對于 RNA-seq 文庫構(gòu)建，DNA 寡核苷酸（單獨(dú)購買）包含在 PCR 擴(kuò)增之前，必須使用熱穩(wěn)定的 5'AppDNA/RNA 連接酶（New England BioLabs；M0319S 或 M0319L）將第二個(gè) RNA-seq 適配器序列添加到 cDNA 的 3' 端。

套件內(nèi)容清單：

TGIRT 試劑盒內(nèi)容（10 次反應(yīng)或 25 次反應(yīng)）：

TGIRT ^® -III 酶，1 x 10 ml (KTGIRT-10) 或 3 x 10 ml (KTGIRT-25)

10X 引物混合物，50毫升(PM-110)

10 x DTT，50毫升(D-121)

5 x 反應(yīng)緩沖液，100毫升(RX-120)

1. 全面的鏈特異性轉(zhuǎn)錄組分析。

TGIRT®-seq 的 ribodepleted、碎片化的通用人類參考 RNA 樣本概括了人類轉(zhuǎn)錄本和 spike-ins 的相對豐度，與非鏈特異性 TruSeq v2 相比，優(yōu)于鏈特異性 Tru-Seq v3。TGIRT®-seq 比 TruSeq v3 具有更高的鏈特異性，并消除了 TruSeq 固有的隨機(jī)六聚體引發(fā)的采樣偏差。TGIRT®-seq 顯示出比 TruSeq 更均勻的 5' 到 3' 基因覆蓋率并識別出更多的剪接點(diǎn)。TGIRT®-seq 支持在與結(jié)構(gòu)化小 ncRNA（包括 tRNA）相同的 RNA-seq 中同時(shí)分析 mRNA 和 lncRNA，而 tRNA 基本上不存在于 TruSeq 數(shù)據(jù)集中。^8個(gè)

2. 人類全細(xì)胞、外泌體、血漿和其他細(xì)胞外 RNA 的 RNA-seq。

快速處理時(shí)間（通過 PCR 步驟構(gòu)建 RNA-seq 文庫 < 5 小時(shí)）；需要少量 RNA（低 ng 范圍）；全面的轉(zhuǎn)錄本概況，包括 mRNA 和 lncRNA 以及小 ncRNA，包括 tRNA、pre-miRNA 和其他結(jié)構(gòu)化小 ncRNA 的全長讀數(shù)；不需要 RNA 連接酶；與傳統(tǒng)方法相比，偏差更小，效率更高，鏈特異性更高。^7,8,15

3. 高度結(jié)構(gòu)化和/或大量修改的 RNA 模板的 RNA-seq。

更高的熱穩(wěn)定性、持續(xù)合成能力和鏈位移使得獲得 tRNA 和其他結(jié)構(gòu)化/修飾的小 ncRNA 的全長、端到端 cDNA 成為可能，它們對逆轉(zhuǎn)錄病毒 RT 具有抗性。^{4-9，12-15。}

4. 通過 TGIRT® 模板轉(zhuǎn)換在 RIP-seq、HITS-CLIP、irCLIP、CRAC、核糖體分析等方法中構(gòu)建 RNA-seq 文庫。

快速處理時(shí)間（通過 PCR 步驟構(gòu)建 RNA-seq 文庫 < 5 小時(shí)）；需要少量 RNA（低 ng 范圍）；不需要 RNA 連接酶，通過減少程序中的步驟減少偏差和提高效率。^1,10,11

5. 人血漿和大腸桿菌 基因組DNA 的 ssDNA-seq。

通過直接在 DNA 鏈的 3' 端啟動(dòng) DNA 合成，同時(shí)連接 DNA-seq 適配器，無需末端修復(fù)、加尾或連接，以更簡單的工作流程捕獲精確的 DNA 末端。能夠分析核小體定位、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)、DNA 甲基化位點(diǎn)和組織來源。¹⁶

上海牧榮生物科技有限公司

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