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| 供貨周期 | 一個月 | 應用領域 | 醫療衛生,環保,化工,生物產業,綜合 |
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HiFiScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
本產品是用于去除基因組DNA進行反轉錄的試劑盒。該試劑盒在 42℃， 2 分鐘即可除去基因組 DNA。同時由于反轉錄試劑中含有抑制 gDNA Eraser 的組分，經過 gDNA Eraser 處理后的樣品可以直接進行逆轉錄反應合成 cDNA。本試劑盒配有新型高效反轉錄酶 HiFiScript，新穎突變位點大幅提 升酶的轉錄活性，cDNA ***鏈合成的效率和產量更高，可利用pg級的總 RNA 或 mRNA 合成 cDNA ***鏈。如逆轉錄產物 cDNA 用于下游熒光定 量檢測，可在 42℃，15 分鐘完成逆轉錄反應。本試劑盒適用于***鏈 cDNA 的合成和后續的 RT-PCR、RT-qPCR、以及全長 cDNA 文庫的構建等。
產品特點1．快速去除基因組：含有去除基因組 DNA 的 gDNA Eraser，只需 2 分鐘即可除去基因組 DNA。2．快速逆轉錄：15 分鐘即可獲得熒光定量 PCR 模板 cDNA 第一鏈合成。3．靈敏度高：可利用 pg 級總 RNA 或 mRNA 模板合成 cDNA 第一鏈。4．高效的逆轉錄效率：新穎突變位點大幅提升酶活性能，獲得更高產量的cDNA。注意事項1．在操作過程中應避免 Rnase 污染，防止 RNA 降解或實驗中的交叉污染，建議操作人員帶口罩和一次性手套并經常更換手套，使用專門的儀器和耗材。2．逆轉錄體系配制在冰上進行操作，防止 RNA 發生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于-20℃保存，并盡量避免反復凍融。3．反應體系可倍比放大，10ul 反應體系可最大使用 1ug 總 RNA。4．Primer Mix 由 Oligo(dT)和 Random primer 配制而成，也可根據實驗需要選用 Oligo-dT Primer 或 Gene Specific Primer。5．若起始 RNA 的量小于 50 ng，建議加入 RNA 酶抑制劑。本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購。6．對于二級結構復雜的 RNA 模板，建議在操作步驟之前，將模板 RNA 在65℃孵育 5 分鐘立刻置于冰上，短暫離心后進行下一步操作。使用方法將模板 RNA 在冰上解凍；試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻，并經短暫離心后使用。
去除基因組 DNA 反應1）根據以下表格在冰上配制反應體系，總體積為 10ul。為了保證反應液配制的準確性，先按反應數+2 的量配制預混體系，然后再分裝到每個反應管中，最后加入 RNA 樣品。
注意：如果總RNA量大于1ug，請按比例擴大反應體系。若起始RNA的量小于50 ng，則建議加入RNA酶抑制劑。2）渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。3）42℃孵育2分鐘（室溫反應時，可以延長到30分鐘）。4）反應結束后，短暫離心，置于冰上冷卻。2. 逆轉錄反應1）根據以下表格在冰上配制反應體系，反應液配制請在冰上進行。為了保證反應液配置的準確性，先按數+2 的量配制成預混溶液，然后再分裝 10ul到每個反應管中，取配制的預混液 10ul 加入至已完成去基因組的步驟 1 反應管中。
注意：Primer Mix 可根據實驗需要使用 Oligo-dT Primer 或 Gene SpecificPrimer，建議 20ul 反應體系 Oligo-dT Primer 50pmol，或 Gene Specific Primer2 pmol。2）混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。3）cDNA 合成反應條件：a. 若下游進行熒光定量 PCR 檢測，42℃孵育 15 分鐘，85℃孵育 5 分鐘。b. 若下游進行普通 PCR 檢測，42℃孵育 30-50 分鐘，85℃孵育 5 分鐘。注意：對于二級結構復雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉錄溫度至50℃，增強逆轉錄效率。4）反應結束后，短暫離心后置于冰上，再進行后續 PCR 或熒光定量 PCR，如果需要長時間保存，請置于-20℃。注意：進行 Real-time PCR 反應時，逆轉錄產物的加量應不超過 PCR 反應總體積的 1/10。
本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
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HiFiScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
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