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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> 黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒

黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒
  • 黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒
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更新時間:2024-05-08 17:23:33瀏覽次數:444評價

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黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒 黃嘌呤氧化酶(xanthione oxidase, XOD)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發需求,提供方便、快捷的服務。

黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

XOD(EC 1.17.3.2催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子,是活性氧主要來源之一;同時也是核苷酸代謝的關鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心,肺,肝臟等組織中,當肝功能受損時,XOD大量釋放到血清中,對肝損害的診斷具有特異性的意義。

測定原理:

XOD催化黃嘌呤產生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:30mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存。

粗酶液提取: 

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

操作步驟:

  1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至290nm,蒸餾水調零。

  2. XOD檢測工作液的配制:用時在每瓶試劑二中加入15mL試劑一,充分混勻,待用;現配現用;

  3. 測定前將XOD檢測工作液在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

  4. 準備96孔UV板一塊(非普通酶標板,普通酶標板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長小于340nm務必使用UV板)。

5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和250μL工作液,立即混勻并計時,記錄290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。

XOD活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)XOD計算:

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=2131×ΔA

2、組織、細菌或細胞中XOD計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=2131×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=4.26×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.6×10-4 L;ε:尿酸摩爾消光系數,1.22×104 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;500:細胞或細菌總數,500萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)XOD計算:

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=4262×ΔA

2、組織、細菌或細胞中XOD計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T =4262×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =4262×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=8.52×ΔA

V反總:反應體系總體積,2.6×10-4 L;ε:尿酸摩爾消光系數,1.22×104 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;500:細胞或細菌總數,500萬。

上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內試劑耗材經銷代理。

  2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

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  5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

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  7. 公司突出創新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優惠的價格。

黃嘌呤氧化酶(XOD)測試盒

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