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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> 多酚氧化酶(PPO)測試盒

多酚氧化酶(PPO)測試盒
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更新時間:2024-05-07 13:35:06瀏覽次數:451評價

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多酚氧化酶(PPO)測試盒 多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發需求,提供方便、快捷的服務。

多酚氧化酶(PPO)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

PPO(EC1.10.3.1)主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。

測定原理:

PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌,后者在525nm有特征光吸收。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:20mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:5mL×1瓶,4℃保存;

粗酶液提取:

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)或果汁樣本的處理:

按照血清(漿)或果汁體積(mL):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取0.1mL血清(漿)或果汁加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

  1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至525nm,蒸餾水調零。

  2. 樣本測定(在EP管中依次加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

樣本

50


煮沸的樣本


50

試劑一

200

200

試劑二

50


蒸餾水


50

37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)中準確水浴10min后,95℃水浴5min,冷卻至室溫,10000g,25℃離心10min,收集上清,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,525nm處檢測測定管和對照管吸光度,計算ΔA=A測定-A對照。

注意:煮沸樣本的操作:取300μL離心上清于EP管中,進行5min 95℃水浴處理;每個測定管需要設一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃水浴處理。

PPO活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)或果汁PPO活性

單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化

0.01為一個酶活力單位。

PPO(U/mL)=ΔA×V反總÷(V液× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷V液

2、組織、細菌或細胞PPO活性

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個

酶活力單位。

PPO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

(2)按樣本鮮重計算:

單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個

酶活力單位。

PPO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。

PPO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.12×ΔA

V反總:反應體系總體積,0.3mL;V液:加入血清(漿)或果汁體積,0.1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,10 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)或果汁PPO活性

單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化

0.005為一個酶活力單位。

PPO(U/mL)=ΔA×V反總÷(V液× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =120×ΔA÷V液

2、組織、細菌或細胞PPO活性

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個

酶活力單位。

PPO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.005÷T =120×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

(2)按樣本鮮重計算:

單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個

酶活力單位。

PPO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =120×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個酶活力單位。

PPO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =0.24×ΔA

V反總:反應體系總體積,0.3mL;V液:加入血清(漿)或果汁體積,0.1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,10 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內試劑耗材經銷代理。

  2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

  3. 提供加急物流處理,進口貨物,最快交期1-2周。

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  5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

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多酚氧化酶(PPO)測試盒






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