緩沖液是弱酸與其共軛堿、或者弱堿與其共軛酸的溶液。在分析化學應用中，如果樣品包含酸性或堿性官能團，反相高效液相色譜(RP-HPLC)通常會使用緩沖液。這類緩沖液可減輕氫/水合氫和氫氧根離子的影響，從而降低pH波動。
基于緩沖類型、離子強度和pH正確選擇緩沖液，是離子分析物RP-HPLC方法開發(fā)最關鍵的步驟。RP-HPLC中離子分析物的保留率主要受流動相pH影響。因此，RP-HPLC流動相pH控制是確保分析物有效分離最重要的參數(shù)之一。
二氧化硅類色譜柱反相分離常用pH值范圍為2到8。此外，由于緩沖液在其pKa值下的pH控制效果佳，故其pKa必須接近所需的pH值。一般來說，最好選擇 pKa 值小于所需流動相 pH 值 2 個單位的緩沖液。我們提供各種 pH 值范圍的 HPLC 級緩沖液，可滿足您實驗室的所有色譜應用需求。
HPLC實驗所用流動相添加劑（緩沖液、鹽、酸和堿）及有機溶劑質量必須適合檢測器靈敏度和洗脫方案。為實現(xiàn)理想的色譜分離效果，建議使用高質量溶劑和試劑。
必須根據(jù)色譜柱外殼材料和固定相性質選擇緩沖液組成及流動相pH值，避免損壞色譜柱硬件和柱床。
緩沖液好溶于水且不會沉淀。將緩沖液與有機溶劑混合時，必須謹慎選擇緩沖液濃度，避免因濃度過高而形成沉淀。否則可能造成泵運行問題，引起HPLC色譜柱堵塞。
與固定相相互作用弱的洗脫液今可從色譜柱上洗脫弱吸附分析物，而強相互作用洗脫液則可洗脫強吸附樣品分子。不同溶劑的洗脫或溶劑強度主要取決于所用固定相的類型。除洗脫強度之外，緩沖液粘度和紫外線吸收率也對HPLC分析適用性存在重要影響。
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