iLite ®技術(shù)

適用于整個藥物開發(fā)過程的多功能工具

iLite技術(shù)基于報告基因檢測格式，為整個藥物開發(fā)過程以及生物藥物監(jiān)測的應用提供了無縫解決方案。  

該技術(shù)幾乎可以針對任何藥物靶標進行開發(fā)，并提供一種簡單、快速和準確的測試格式，用于測量和量化藥物活性和免疫原性。細胞以 Assay Ready 格式提供，無需細胞培養(yǎng)，并允許在部門之間或第三方合作者之間無縫轉(zhuǎn)移檢測。

通過將歸一化讀數(shù)和嵌合轉(zhuǎn)錄因子等功能與高度靈活的產(chǎn)品格式相結(jié)合，iLite技術(shù)可幫助您充分利用生物測定。

工作原理 - iLite ®基于細胞的技術(shù)原理

iLite基于細胞的檢測基于簡單的報告基因技術(shù)。對特定靶標或配體具有特異性的受體在細胞表面表達。一旦配體與受體結(jié)合，就會觸發(fā)細胞內(nèi)信號級聯(lián)，從而導致啟動子區(qū)域與報告基因融合，在本例中為螢火蟲熒光素酶。 

報告基因的激活以及底物的添加將產(chǎn)生光。光量與與受體結(jié)合的配體的量和活性相關(guān)。

雙報告基因系統(tǒng)

當配體與其受體結(jié)合時，特定的細胞內(nèi)信號傳導途徑被激活，觸發(fā)編碼熒光素酶的特定報告基因構(gòu)建體的轉(zhuǎn)錄。當添加底物時，熒光素酶產(chǎn)生光，然后可以使用光度計將熒光素酶的量以及由此配體的量和活性測量為光發(fā)射。

iLite細胞是它們還包含第二個報告基因，該基因受組成型啟動子控制，這意味著它在任何活細胞中連續(xù)表達。換句話說，第二個報告基因產(chǎn)生的光量將與活細胞的數(shù)量相關(guān)，因此可用于標準化結(jié)果以補償細胞數(shù)量的差異。

ILITE ADCC 技術(shù) - 它是如何工作的？抗體依賴性細胞介導的細胞毒性 (ADCC) 是一種免疫反應，其中攜帶 Fc 受體的效應細胞識別并殺死表面表達腫瘤或病原體特異性抗原的抗體包被的靶細胞。許多基于抗體的療法至少部分依賴于它們在患者中誘導 ADCC 的能力。 iLite  ADCC 產(chǎn)品線提供了一種方便而強大的方法來測量抗體在體外 引發(fā) ADCC 的功效 。  

基于 Fc 受體、抗體和靶標交聯(lián)的發(fā)光

當效應細胞與與其靶細胞結(jié)合的藥物抗體相互作用時，ADCC 過程就會被觸發(fā)。效應細胞表面上的FcγIIIa (CD16a)受體與抗體的Fc區(qū)結(jié)合，從而在效應細胞和靶細胞之間建立橋梁。

在形成該橋之后，工程化的效應細胞將通過細胞  內(nèi)途徑產(chǎn)生熒光素酶，并專門從這種交聯(lián)和信號傳導中產(chǎn)生發(fā)光，而不是像在體內(nèi)情況下那樣裂解靶細胞。發(fā)光的強度與藥物誘導 ADCC 的能力相關(guān)。

與抗體結(jié)合后，效應細胞中的 NFAT、CREB、NfκB、API 和 Jak-STAT 通路被激活。控制螢火蟲熒光素酶基因的啟動子經(jīng)過巧妙設計，包含所有這些途徑的結(jié)合位點。與僅依賴 NFAT 響應啟動子的市售報告基因相比， 這更接近地反映了體內(nèi)FcγRIIIA 信號轉(zhuǎn)導途徑。  

標準化基因可輕松進行樣本之間的比較

與大多數(shù)iLite細胞系一樣，iLite ADCC 效應細胞也具有次級熒光素酶讀數(shù)，來自在組成型啟動子控制下表達的熒光素酶基因。這使得能夠根據(jù)細胞數(shù)量對每個單獨的讀數(shù)進行標準化，并補償潛在的基質(zhì)效應。    

工程化靶細胞可篩選非特異性激活  

iLite ADCC 系統(tǒng)配備了一套工程同系物 (+) 和 (- )靶細胞，可以精確、特異性地確定 ADCC 活性的差異。它還可以比較針對相同抗原的不同治療抗體之間的 ADCC 活性。 

目標 (+) 細胞

靶（+）細胞 已被設計為通過內(nèi)源表達的過度激活或通過插入編碼該抗原的基因來過度表達特定抗原。

這使得抗原在細胞表面上得到穩(wěn)定且受控的表達。

目標 (-) 細胞

目標 (-) 細胞 基于與目標 (+) 細胞相同的細胞背景，但不呈現(xiàn)特定的表面目標分子。因此，效應器和靶細胞之間無法通過抗體建立交聯(lián)，并且不會產(chǎn)生螢火蟲熒光素酶的發(fā)光。

因此，特異性抗原陰性靶細胞提供了一種檢測和校正有時在人血清樣品中觀察到的非特異性效應的方法。