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ELISA標本的處理與注意事項
閱讀：953 發布時間：2022-10-10 ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。
ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據，為了保證實驗數據的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質量控制和全過程質量控制，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。
ELISA標本的處理：
1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，如有沉淀形成，應再次離心
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養上清：檢測分泌性的成分時，用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）仔細收集上清，檢測細胞內的成分時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右，通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成分。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷凍保存備用，標本融化后任然保持2-8°C的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，分裝后一份待檢測，其余冷凍備用，
6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行試驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20°C保存，單應避免反復凍融。
在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
注意事項：
1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類，如果要做復孔，標本量收集體積=100ulx檢測種類x2
2、樣本收集后若在一周內進行檢測可保存于2-8°C，若不及時檢測，請進行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復凍融
3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關文獻預估樣本中待測物的濃度并通過預實驗確定樣本。
4、血清標本采集是應注意避免溶血，紅細胞溶解是會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，溶血標本可能會增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測的準確性，必須正確收集尿液標本和保存，收集尿液的容器必須要清潔干燥，最好使用一次性的容器，避免因用藥并清潔不到而造成的污染，尿液樣本必須新鮮，留取后，應及時檢測或保存
6、標本宜在新鮮是檢測如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中可能發生聚合，間接法ELISA中樂視本底加深，
7、反復凍融會使蛋白效價降低，所以待測樣本如需多次檢測，宜少量分裝凍存。