用途：CRM-ATX是一種校準溶液認證的參考物質（CRM），設計用于ATX-a的分析方法開發和準確定量。CRM濃度使其適用于制備稀釋系列，用于儀器校準，如通過紫外吸收（LC-UV）、熒光（LC-FL）或質譜（LC-MS）檢測的液相色譜法，以及用于加標回收實驗的對照樣品。

制備：ATX-a是從Aphanizomenon issatschenkoi的藻類培養物中分離出來的[3]。從細胞中提取毒素，通過色譜純化，然后真空干燥成無水形式[4，5]。CRM溶液通過將純化的ATX-a溶解在用0.01%乙酸脫氣的甲醇/水（9:91，v/v）中來制備。在氬氣下，用涂有聚四氟乙烯的攪拌棒和磁力攪拌器將溶液充分混合。將等分試樣分配到預先填充氬氣的琥珀色玻璃安瓿中，然后立即對其進行火焰密封。每個安瓿含有大約0.5毫升溶液。

結構確認和純度評估：

通過以下技術檢查毒素的純度：500 MHz 1H NMR光譜、LC-MS[6]、LC-UV、毛細管電泳紫外檢測（CE-UV）[7]和液相色譜化學發光氮檢測（LC-CLND）[8]。通過核磁共振波譜[9]和四極飛行時間（QToF）質譜法證實了ATX-a的分子結構。ATX-a的1H NMR光譜如圖1所示。在166.12269 Da處獲得了[M+H]+離子的準確質量，其在166.12264 Da的理論單同位素質量的0.05 mDa（Δ=

0.30ppm）。還獲得了[M+H]+離子的串聯質譜，如圖2所示。使用NMR、LC-MS、LC-UV和LC-CLND來估計ATX-a的純度。沒有觀察到主要雜質。

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