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蛋白表達(dá)純化中的表達(dá)是指用模式生物如細(xì)菌、酵母、動物細(xì)胞或者植物細(xì)胞表達(dá)外源基因蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。純化是指利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其它蛋白中純化出來的一種生物化學(xué)方法。蛋白質(zhì)量表征是指通過表征蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)、熱穩(wěn)定性以及聚集態(tài)等信息來評估所獲取蛋白質(zhì)量的一種物理化學(xué)方法。
蛋白表達(dá)純化的方法主要可以分為三類沉淀、離心和層析。具體可以分為：
鹽析沉淀是在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀出來的方法。等電點(diǎn)沉淀是利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度低而不同蛋白質(zhì)又具有不同等電點(diǎn)的特點(diǎn)進(jìn)行分離的方法。有機(jī)溶劑沉淀是利用與水互溶的有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低而沉淀的方法。
速率區(qū)帶離心是根據(jù)顆粒在介質(zhì)中的沉降速度不同來分離試樣的方法。差速離心是逐漸提高離心速度來分離不同大小的細(xì)胞器的方法。
疏水相互影響層析是利用蛋白質(zhì)表面的疏水部位和固定相上的疏水基團(tuán)的結(jié)合來分離不同蛋白質(zhì)的方法。凝膠層析是利用混合物隨流動性相流過配有凝膠固定不動相的層析柱時(shí)速度不一致而分離的方法。由于存在特異性低、純化蛋白純度不高和活性低等缺點(diǎn)，在實(shí)際生產(chǎn)中用的頻次比較低。應(yīng)用較多的純化方法是層析法中的親和層析和離子交換層析。
