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采用液質聯用儀測定尼羅羅非魚中的多種抗生
閱讀：543 發布時間：2022-5-17摘要：我們開發和驗證了一種同時測定尼羅羅非魚 (Oreochromis niloticus) 魚肉中 11 種不同類抗生素的方法。樣品預處理過程包括使用 5 g 魚肉、1 mL 0.1 M Na2EDTA 溶液和 24 mL乙腈：水（含 0.1% 甲酸）(70:30) 進行提取，然后通過 Captiva 小柱進行純化。單次運行中即可完成這些化合物的測定。所有化合物的定量限(LOQ) 均低于 4.3 µg/kg，回收率范圍為 83.8 - 110.1%，測量準確度低于 5.5%。
前言世界上的水產養殖業以每年約 9% 速度不斷在擴大 [1]。在巴西，漁產品的增長從 2007 年到 2009 年只有 60.2%，而羅非魚產量 7 年間卻增長了 105% (2003–2009) [2]。這迫使水產養殖業越來越多地依賴化學藥品的投入。由于放養密度很高，生物體間經常互相攻擊受傷，導致化學藥品需求增加，尤其是抗生素。然而，漁產品進口國如歐共體國家和美國，對抗生素殘留制定了越來越嚴格的*。由于藥物的濫用，動物源性產品中的抗生素殘留頗受消費者關注。這些殘留可能有毒性，也會使一些敏感個體發生過敏反應。另外，長期攝入食品中低劑量的抗生素也會導致耐藥微生物的蔓延。本研究介紹了一種采用 Captiva 小柱進行化學過濾和 ESILC/MS/MS 分析的快速方法。Captiva 小柱（部件號 A5300002）的主要優點是可以非常簡便高效地去除沉淀蛋白和顆粒物質。為獲得更可靠的結果，使用氘代磺胺地托辛-d6 作為內標。根據歐盟委員會決議 2002/657/EC，對所開發方法的選擇性、線性、準確度、基質效應、精密度和靈敏度進行了充分驗證 [3]。
實驗部分化學品所用溶劑甲醇和乙腈為 HPLC 級 (Tedia)。所用試劑甲酸 (Vetec)和 Na2EDTA (Sigma-Aldrich) 均為分析級。每個化合物的標準儲備液 (100 µg/mL) 用甲醇制備，置于棕色瓶中，在 –20 °C 下可保存 6 個月。混標工作液 (1000 µg/L) 通過用水適當稀釋儲備液來制備，在低于 5 °C 的條件下保存，每周更新。樣品前處理將 5 g樣品置于 50 mL螺旋蓋聚四氟乙烯管中。加入 50 µL磺胺地托辛-d6 溶液 (1.0 µg/mL) 作為內標，然后加入 1 mL 0.1 M Na2EDTA溶液和 24 mL 乙腈：水（70: 30，含 0.1% 甲酸）混合溶劑。該混合物采用 Marconi ultraturrax 分散機 (MA102) 混勻 5 min，然后采用Hitachi CF16RXII 離心機在 1370 xg 的離心力下離心 5 min。采用 Manifold Supelco Visiprep 系統，將 500 µL 上清液加入 CaptivaND 小柱（部件號 A5300002）進行洗脫，洗脫液收集在 2 mL 樣品瓶中，并采用 LC/MS/MS 進行分析。
LC/MS/MS 方法液相色譜條件儀器 Agilent 1200 Infinity 系列液相色譜系統色譜柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（3 × 100 mm，3.5 µm）柱溫 30 °C流動相 A) 0.1% 甲酸水溶液B) 0.1% 甲酸乙腈溶液梯度程序 時間 (min) %A %B0 95 513 5 95流速 0.4 mL/min進樣量 10 µL質譜條件儀器 Agilent 6430 三重四極桿液質聯用系統電離模式 ESI（正）干燥氣流速 10 L/min霧化器壓力 50 psi干燥氣溫度 350 °C毛細管電壓 4000 V軟件 Agilent Mass Hunter(B.03.01)檢測模式 多反應監測 (MRM)驗證和定量分析程序對提出的程序與歐盟委員會決議 2002/657/EC 標準進行一致性的驗證，主要考慮了以下參數：特異性、檢出限 (LOD) 定量限和LOQ、精密度以及回收率。在 5 - 400 µg/kg 范圍內取 11 個目標化合物的 7 個不同濃度，采用空白和加標樣品進行基質匹配的校準 (MMC)。每個濃度平行分析三次。采用內標法測定樣品中目標化合物的濃度。為獲得更可靠的結果，使用氘代磺胺地托辛-d6 作為內標。
通過加標樣品中檢出分析物的量與加標量的比值來計算回收率，以百分率表示。經證實，所開發的方法精度好、準確度高，能可靠用于抗生素的測定。
結論本文詳述了尼羅羅非魚魚肉中選擇性測定不同種類抗生素的方法開發。方法采用三重四極桿液質聯用系統，具有很高的準確度、精密度和靈敏度。它可以對漁場中低至 ppb 級的目標化合物進行鑒定和定量分析。擬定的提取程序非常簡單，樣品處理不需要附加凈化步驟即可獲得滿意回收率。