單道移液器在長期使用過程容易會因為移液槍中某個部件出現偏差（如彈簧不可逆形變、活塞與活塞缸不致密、活塞移動不均勻等）而導致實際移液量不準確且操作員很難發現，影響實驗結果。因此有必要對其進行校準。
單道移液器校準步驟
1、溫度要求：移液器校準時必須在室溫條件(25+/-2℃)下進行。
2、參照移液器的使用說明，不同刻度10000\5000\1000\200ul必須分別進行校準。
3、將移液頭里的氣泡排除，選擇好需要校準的刻度。
4、將一空容器放在精度為0.1 毫克的電子天平上去皮。
5、按加液鍵，將水加入空容器中稱重，記錄讀數。
6、按照國標，移液器的校準采用“三點測試（最大量程的100%，50%和10%），每點六次”的規則，而供應商通常會選擇兩種規則：
一是簡易校準，也就是兩點測試（最大量程的100%和10%），每點四次;
二是嚴格校準，也就是三點測試（最大量程的100%，50%和10%），每點十次。使用者根據自己的實際需求選擇一種規則完成測試后即進入計算環節。(根據平均值與實際值間的絕對差值進行調節，用工具來擰彈簧卡扣的松緊)
