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逐典重組胰蛋白酶:一款滿足藥典要求的GMP級非動物源胰蛋白酶

2024-4-10  閱讀(110)

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細胞是生物體結構和功能的基本單位,是生命活動最小的組織單位。細胞培養則是生命科學研究領域“王冠"上的“明珠"。在細胞培養過程中,細胞消化是一項重要的步驟,通過細胞消化可使培養過程中產生的粘連蛋白被分解掉,讓細胞分散,而且有利于細胞進行營養交換,從而維持細胞的正常生命周期和功能。

細胞消化液可以通過不同的方法制備,常見的方法包括酶消化、堿性溶液消化等。細胞培養中使用的消化液通常根據具體培養細胞的要求進行配制。總的來說,細胞消化液在維持細胞功能、代謝物質和清除廢物等方面起著至關重要的作用。它使得細胞能夠高效地進行消化、吸收和代謝,從而維持細胞的正常生命周期和功能。

細胞消化液之一是胰蛋白酶,在進行原代培養時可將組織塊消化解離形成細胞懸液,傳代培養時也可將貼壁細胞從瓶壁上消化下來。

逐典重組胰蛋白酶

Trypelectase 重組胰蛋白酶是逐典生物專門為疫苗、病毒載體生產設計,具有高效、非動物源和高質量標準的特點。該胰蛋白酶氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致,由大腸桿菌(E.col) 重組表達生產。在GMP級別環境中生產的重組胰蛋白酶能高效消化貼壁細胞且不造成傷害,產品質量滿足藥典要求。

逐典重組胰蛋白酶特點

1.GMP級生產環境、符合藥典標準

2.重組生產、不含雜酶

3.批量生產、質量穩定

4.高純度、高比活

5.非動物源原料

逐典重組胰蛋白酶應用場景

組織塊的消化解離和原代細胞的獲取、貼壁細胞的傳代消化和收獲、微載體方法培養的細胞消化和收獲。

實驗數據

CT26.WT 和 HEK293FT 細胞消化實驗

CT26WT和HEK293FT在經Trypelectase重組胰酶消化3min后解離效果較好,細胞活率顯示對細胞傷害較小,不會影響細胞傳代。




Trypelectase重組豬胰酶對細胞消化過程及傳代24h細胞貼壁圖

逐典重組胰蛋白酶常見問題

Q:逐典重組胰蛋白酶配置是否需要過濾?

A:需要使用0.22μm濾膜除菌過濾,這個在母液配置和工作液(即稀釋后)的配置中都是需要的。

Q:逐典重組胰酶產品是否是無菌產品?

A:不是無菌產品,產品COA中是微生物限度標準為100CFU,所以在配置使用前需要進行無菌過濾。

Q:逐典重組胰蛋白酶的配置有哪些環節?分幾步?

A:重組胰酶從干粉到能直接使用的工作液需要兩大環節。第一步:需要配置成低PH的母液,除菌過濾;第二步:再進行中性緩沖液稀釋,過濾除菌后就能直接使用了。

Q:逐典重組胰酶的主要優點是那些?

A:非動物來源、GMP環境生產、高酶活、高穩定性。

Q:逐典重組胰酶的建議使用濃度是多少?

A:配置母液的濃度是10 mg/ml,配置工作液濃度是0.5 mg/ml。

Q:逐典重組胰酶產品如何保存?干粉?母液?工作液?

A:一般來說,我們的干粉產品 -20℃保存 2年沒有問題, 配成母液-20℃保存 1年沒有問題,工作液的話-20℃保存 1-3個月沒有問題,臨時用放在4℃可保存一周內,但還是建議客戶現用現配。

Q:消化細胞的胰酶是不是濃度越高越好?

A:不是的,一般來說消化細胞會有一個最佳胰酶濃度,達到最適濃度后濃度升高會傷害細胞。

Q: 細胞消化時間長是不是意味著胰酶產品性能不行?

A: 一般的細胞消化時間3-5min都是很正常的,難消化的細胞10-15min也是存在的。 細胞消化時間長短不能決定產品性能,產品的比活、活性、級別、生產技術、以及質量標準等因素都是評判產品性能的條件。

Q: 如何控制胰酶消化時間?

A: 不同細胞對消化液的敏感性不同,胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度,是否含EDTA,胰酶的儲存時間,胰酶的儲存溫度,是否反復凍融,消化加入的胰酶體積,消化溫度及細胞的密度有關。


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