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中級(jí)會(huì)員·6年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 技術(shù)文章 > 應(yīng)用說(shuō)明 | Beacon®單細(xì)胞光導(dǎo)平臺(tái)探索抗體發(fā)現(xiàn)的物種多樣性
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在不斷發(fā)展的生物制藥和生命科學(xué)研究領(lǐng)域，尋找具有特性的新抗體至關(guān)重要。篩選不同動(dòng)物物種的原代B細(xì)胞的能力將擴(kuò)大回收抗體序列的多樣性，并能夠提升為治療、檢測(cè)試劑和基礎(chǔ)研究的不同應(yīng)用找到最佳抗體的幾率。然而挖掘這些物種的抗體潛能一直具有挑戰(zhàn)性。在最新發(fā)布的應(yīng)用說(shuō)明中，我們概述了布魯克Beacon®單細(xì)胞光導(dǎo)系統(tǒng)和Opto® B Discovery產(chǎn)品組合如何提供一種快速篩選不同物種原代B細(xì)胞的新方法。
Opto® Memory B Discovery Workflow
Beacon®單細(xì)胞光導(dǎo)系統(tǒng)上的Opto® B Discovery 產(chǎn)品組合能夠在一周內(nèi)對(duì)來(lái)自小鼠、人類和兔子原代樣品的B細(xì)胞進(jìn)行功能篩選，從而快速選擇先導(dǎo)分子。將布魯克現(xiàn)有的 Beacon®單細(xì)胞光導(dǎo)系統(tǒng)與現(xiàn)已上市的Opto® Memory B Discovery試劑盒結(jié)合使用，可降低任何新物種的BCR全部成分的進(jìn)入門檻，因?yàn)槎喾N培養(yǎng)基配方已經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可支持不同動(dòng)物的B細(xì)胞激活和存活，并且許多現(xiàn)成試劑可用于B細(xì)胞富集和篩選（圖1）。
圖1. Opto Memory B Discovery工作流程可在一周內(nèi)快速分離和激活記憶B細(xì)胞、功能優(yōu)先的單B細(xì)胞篩選以及單克隆抗體序列的回收。
在不斷發(fā)展的生物制劑領(lǐng)域，找到具有特性的新抗體至關(guān)重要。在不同動(dòng)物物種中篩選原代B細(xì)胞的能力擴(kuò)大了回收的抗體序列的多樣性，并增加了在治療抗體、試劑抗體和基礎(chǔ)健康研究的多種應(yīng)用領(lǐng)域找到最佳抗體的可能性。然而，挖掘這些物種的抗體潛力一直具有挑戰(zhàn)性。
Opto® Memory B Discovery樣品制備試劑盒能夠激活來(lái)自各種組織的記憶B細(xì)胞，包括新鮮外周血、整個(gè)器官（例如脾和淋巴結(jié)）和冷凍保存的PBMC，可實(shí)現(xiàn)人類和兔子記憶B細(xì)胞的穩(wěn)健、無(wú)飼養(yǎng)層激活（圖2），然后進(jìn)行芯片上測(cè)定篩選和下游序列回收。提供了一種快速篩選不同物種的原代B細(xì)胞的新方法。
圖2. 從血液或脾臟樣本中分離記憶B細(xì)胞，用Opto® Memory B Discovery樣品制備試劑盒（人或兔）激活，以產(chǎn)生適合篩選的抗體分泌細(xì)胞
我們最新的應(yīng)用說(shuō)明深入探討了這些試劑盒的適用性，證明了它們與來(lái)自小鼠、大鼠、羊駝、雞、牛、山羊和綿羊組織的記憶B細(xì)胞的兼容性。通過(guò)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)，我們成功激活并篩選了來(lái)自相容物種的B細(xì)胞，從而通過(guò)下一代測(cè)序回收目標(biāo)抗體序列。我們還探索了記憶B細(xì)胞分離和激活的過(guò)程，展示了我們專有的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基的效率和培養(yǎng)四小時(shí)后仍然能分泌IgG抗體的比例（圖3）。
圖3. 活化B細(xì)胞在芯片上加載4小時(shí)后繼續(xù)分泌IgG抗體的比例。
總體而言，我們證明人類和兔的Opto® Memory B Discovery試劑配方與小鼠、大鼠、羊駝、山羊和綿羊B細(xì)胞兼容，但是針對(duì)牛或雞B細(xì)胞的激活仍然需要優(yōu)化。利用Beacon®系統(tǒng)的高通量能力，我們分離并篩選了數(shù)千到上萬(wàn)個(gè)單個(gè)B細(xì)胞，加速抗體發(fā)現(xiàn)過(guò)程。雖然有些物種的抗體發(fā)現(xiàn)流程仍然需要提升，我們的發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。
在這篇應(yīng)用說(shuō)明中除了為小鼠、人和兔單B細(xì)胞篩選提供優(yōu)化的端到端工作流程外，研究人員還可以輕松調(diào)整第三方試劑，以快速實(shí)現(xiàn)與其他技術(shù)仍無(wú)法實(shí)現(xiàn)的其他高價(jià)值物種庫(kù)的兼容性。擴(kuò)大對(duì)廣泛物種序列多樣性的探索，使研究人員能夠撒下更大的網(wǎng)，以增加發(fā)現(xiàn)用于開發(fā)新型療法、診斷和試劑的抗體的機(jī)會(huì)。
