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D-螢光素 (D-Luciferin) 是熒光素酶的常用底物。D-螢光素利用熒光素酶報(bào)告基因在活體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生熒光，從而使用高靈敏度的光學(xué)檢測儀器檢測動(dòng)物活體體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因行為，普遍應(yīng)用于生物領(lǐng)域，特別是生物活體成像技術(shù)。
問題答疑
Q:D-熒光素鉀鹽與D-熒光素鈉鹽、D-熒光素的區(qū)別
A:D-熒光素鉀鹽、D-熒光素鈉鹽以及D-熒光素的主要區(qū)別體現(xiàn)在它們的溶解和分散性能上。D-熒光素是游離態(tài)，D-熒光素鈉鹽和D-熒光素鉀鹽是鹽形式，游離態(tài)的D-熒光素難溶于水，需要酸堿進(jìn)行助溶，難以應(yīng)用于生物活體，鹽形式更易溶于水，能滿足實(shí)驗(yàn)劑量需求。與熒光素鈉鹽相比，D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度較高，且溶解速度較快，因此在一般的生物學(xué)試驗(yàn)中，D-熒光素鉀鹽常被選用。
Q:D-熒光素鉀鹽的適用場景
A:D-熒光素鉀鹽作為活體成像底物，活體體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶是D-熒光素鉀鹽作為活體成像底物應(yīng)用的關(guān)鍵前提。只有在熒光素酶存在并穩(wěn)定表達(dá)的情況下，D-熒光素鉀鹽才能發(fā)揮其在活體成像中的重要作用。
D-熒光素鉀鹽可以做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，且無需裂解液。D-熒光素鉀鹽本身是粉末，成分單一，不包含裂解成分。D-熒光素鉀鹽具有出色的水溶性和脂溶性，這使其能夠輕松穿透細(xì)胞膜和血腦屏障這一特性使得D-熒光素鉀鹽能夠迅速進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，與細(xì)胞內(nèi)的熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，從而產(chǎn)生明亮的發(fā)光信號。
D-熒光素鉀鹽可以用于干細(xì)胞示蹤的活體成像，
干細(xì)胞標(biāo)記主要有兩種形式：
a. 慢病毒標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞。慢病毒標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞是一種常見的標(biāo)記手段，通過將熒光蛋白基因整合到慢病毒載體中，并感染神經(jīng)干細(xì)胞，可以使干細(xì)胞表達(dá)熒光蛋白。
b. 可標(biāo)記組成性表達(dá)的基因，做成轉(zhuǎn)基因小鼠，從該小鼠的骨髓取出已標(biāo)記的造血干細(xì)胞。
在這種方法中，研究者將熒光蛋白基因插入到小鼠的基因組中，使其在小鼠的所有細(xì)胞中組成性表達(dá)。從這種轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓中取出的造血干細(xì)胞自然攜帶熒光蛋白標(biāo)記。
