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在生物制品的制備中,不可忽視DNA殘留的去除,細胞裂解釋放目標產(chǎn)物的同時,也會產(chǎn)生一些雜物。隨著越來越多的生物制品(重組蛋白、Vero細胞疫苗、細胞治療藥物等)進入治療領(lǐng)域,核酸殘留是各類質(zhì)控標準的重中之重。
我國參照WHO、FDA和歐盟標準,在藥典中對生物制品的宿主細胞殘留有明確規(guī)定,藥典規(guī)定酵母、大腸桿菌表達的生物制品中HCD殘留不超過10ng/劑,CHO、Vero細胞表達的EPO、狂犬疫苗、乙肝疫苗等不超過100或10pg/劑量,殘留DNA長度小于200bp。
Pannarase是一種來自于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens),經(jīng)基因工程改造的核酸內(nèi)切酶。
Pannarase高活性地降解各種類型的DNA和RNA,包括雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀等,將核酸降解成3~5個堿基長度的5’-單磷酸寡核苷酸,所以又被稱為“全能核酸酶"。
一,逐典Pannarase全能核酸酶優(yōu)勢
1.無動物源性、無氨芐青霉素
2.更高的單位比酶活、更高效的核酸降解能力
3.先進的生產(chǎn)工藝,非傳統(tǒng)His標簽純化、排除引入金屬離子風險
4.嚴格的質(zhì)控標準,內(nèi)毒水平低,確保單位酶活的準確性以及批次間穩(wěn)定性
二,全能核酸酶應(yīng)用條件
全能核酸酶的酶活會受到多種因素的影響(例如溫度、pH、離子強度等),故用量范圍也會從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此,不同的操作環(huán)境下酶的最佳濃度不同,需要通過實驗設(shè)置梯度進行最佳條件的摸索。
應(yīng)用實例:
樣品:狂犬病毒濃縮液
處理條件:核酸酶濃度50~90U/ml ,
37 ℃處理 2 h,轉(zhuǎn)入18 ~ 26 ℃處理 6h

表 1.不同酶濃度對狂犬病病毒收獲液中 Vero 細胞 DNA 的去除效果【1】
樣品:狂犬病病毒濃縮液
處理條件:25、50和100 U/ml,37℃

表 2.不同濃度核酸酶作用不同時間去除 Vero 細胞 DNA 效果的比較[2]
樣品:流感病毒濃縮液
處理條件:10 U/mL,37℃

表 3.核酸酶處理 300k 超濾濃縮效果(x± s,n=3)[3]