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全能核酸酶，又稱非限制性核酸內(nèi)切酶，是一種主要來源于細(xì)菌Serratia Marcescens的非特異性核酸內(nèi)切酶，能夠降解各種形式的DNA和RNA，無論是雙鏈還是單鏈，線狀還是環(huán)狀，天然的還是經(jīng)過變性處理的。酶切產(chǎn)生的產(chǎn)物主要是2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，這是其酶切特征。在實(shí)驗(yàn)研究和工業(yè)生產(chǎn)中都有廣泛的應(yīng)用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，全能核酸酶的應(yīng)用領(lǐng)域還將不斷擴(kuò)大。全能核酸酶都是目前能夠同時有效去除DNA和RNA的酶。
一，廣闊的應(yīng)用場景
1、降低細(xì)胞/細(xì)菌裂解時核酸釋放產(chǎn)生的黏度，并且適用于任何裂解方式。
2、在大規(guī)模的層析純化時，避免由于大量的核酸吸附在層析介質(zhì)上降低蛋白質(zhì)的有效載量從而降低純化得率。
3、在 ELISA、二維電泳和免疫印跡分析中，提高分辨率和回收率。
4、消除重組蛋白、疫苗等生物制品的外源性核酸殘留。
二，病毒生產(chǎn)與純化
病毒疫苗的生產(chǎn)、基因與細(xì)胞治療等產(chǎn)業(yè)均可能會用到病毒，這些產(chǎn)品的質(zhì)量控制對于保障這些產(chǎn)品的安全性和有效性具有重要意義。其中宿主DNA殘留可能會傳遞腫瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在的危險性，各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對其殘留量有著嚴(yán)格的限度控制。
接下來小編帶您一起了解在病毒純化過程中如何正確使用全能核酸酶。
常見的病毒純化流程
三，全能核酸酶的使用時間
我們可以選擇在收獲前、澄清后或是純化后用全能核酸酶處理樣品，一般選擇在收獲前或澄清后處理，可以提高病毒得率。
早期使用：可以減少大的DNA片段，并且可以在下游純化步驟中去除殘留的全能核酸酶。 但為了去除樣品中大量的核酸，必須使用大量的酶。
后期使用：節(jié)約全能核酸酶的用量，降低成本；但必須增加一個去除全能核酸酶殘留的步驟，并且，采用這種方式可能會導(dǎo)致病毒的得率減少。
四，全能核酸酶用量及處理時間
全能核酸酶的活性受到多種因素的影響（溫度、pH、離子強(qiáng)度等），用量范圍從0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作環(huán)境酶的最佳濃度不同，需要通過實(shí)驗(yàn)測定。
五，應(yīng)用實(shí)例：
1.樣品：狂犬病毒濃縮液
處理?xiàng)l件:核酸酶濃度50~90U/ml ,
37 ℃處理 2 h,轉(zhuǎn)入18 ~ 26 ℃處理 6h
表 1.不同酶濃度對狂犬病病毒收獲液中 Vero 細(xì)胞 DNA 的去除效果【1】
2.樣品：狂犬病病毒濃縮液
處理?xiàng)l件：25、50和100 U/ml，37℃
表 2.不同濃度核酸酶作用不同時間去除 Vero 細(xì)胞 DNA 效果的比較【2】
3.樣品：流感病毒濃縮液
處理?xiàng)l件：10 U/mL，37℃
表 3.核酸酶處理 300k 超濾濃縮效果(x± s，n=3)【3】
參考文獻(xiàn)
[1] 崔燕平. 非限制性核酸內(nèi)切酶對狂犬病疫苗中Vero細(xì)胞DNA的去除作用[J]. 中國生物制品學(xué)雜志, v.27(04):444-447.
[2] 劉杰,劉輝,楊會強(qiáng),康莊,孫艷,毛川成,何敏,李玉華.多種方法結(jié)合去除凍干人用狂犬病疫苗中Vero細(xì)胞殘留DNA[J].中國生物制品學(xué)雜志,2013,26(12):1827-1830.
[3] 阮朝列,施錦麗,李衛(wèi)東等.Benzonase核酸酶在Vero細(xì)胞流感病毒滅活疫苗中的應(yīng)用研究[J].病毒學(xué)報,2023,39(04):980-990.
