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mRNA研究伴侶——報告基因類型知多少?

2024-1-22  閱讀(172)

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在分子生物學研究范疇中,報告基因(reporter gene)作為常用的基因工具,發揮著不可替代的重要作用。報告基因是一種編碼易被檢測的蛋白質基因,與目的基因融合表達后,其表達產物可以用來標定目的基因的表達情況。通常通過直接測定報告基因mRNA、蛋白或酶活性來檢測報告基因是否在細胞中表達。

在分子生物學研究中,報告基因確實是一個非常重要的工具。報告基因是一種編碼易被檢測的蛋白質的基因,當它與目的基因融合后,可以通過檢測報告基因的表達產物來了解目的基因的表達情況。報告基因的表達產物可以是mRNA、蛋白質或酶等,這些產物可以被特定的檢測方法所識別和測量。

作為報告基因,在遺傳選擇和篩選檢測方面必須具有以下幾個條件:

① 已被克隆和全序列已測定;

② 表達產物在受體細胞中不存在,且在被轉染的細胞中無相似的內源性表達產物;

③ 其表達產物能進行定量測定。

除此之外,理想的報告基因還應做到細胞內其它基因的產物不會干擾報告基因產物的檢測,并且產物檢測方法應該快速、簡便、靈敏度好且重復性好。



隨著科學技術的不斷發展,報告基因的種類越來越豐富。綠色熒光蛋白基因(GFP)因其易于檢測、熒光性質穩定、無細胞毒性、可用于活細胞檢測等優點,而被廣泛用于生命科學研究。用395nm的紫外線和475nm的藍光激發,GFP可在508nm處自行發射綠色熒光,無需輔助因子和底物,用常規的熒光顯微鏡即可定性檢測胞內表達情況。增強型綠色熒光蛋白(eGFP)突變體,發射出的熒光強度比野生型GFP大6倍以上,因此,比GFP更適合作為一種報告基因來研究基因表達、調控、細胞分化及蛋白質在生物體內定位和轉運等。

除常見的GFP外,紅色熒光蛋白在1999年被報道,以其能夠與GFP共同使用,解決一些GFP單獨解決不了的科學問題,同時因其激發和發射波長更長,在細胞內成像時背景低等優點,受到廣大科研工作者的青睞。如mCherry是一種紅色熒光蛋白的變種,來自于mushroom coral的紅色熒光蛋白,被廣泛用于生物技術作為示蹤劑的紅色熒光染料,包括分子的標記和細胞組分的定位等。表現出熒光亮度及光穩定型,以及更低的細胞毒性。

螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)是一種分子量約為61kD的蛋白,在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會發出波長為560nm左右的生物螢光(bioluminescence),是目前體內外檢測實驗中常用螢光素酶,可作為對照研究靶基因在哺乳動物細胞中的翻譯效率,細胞活力和體內成像測定。

逐典螢光素酶報告基因



針對報告基因檢測不同的側重需求,逐典推出了3種檢測系統。



逐典螢光素酶報告基因特點:

1. 檢測靈敏度高,信號穩定性好

HEK293-NFK B-LUC細胞加入梯度稀釋的TNF 在37C、5%CO條件下刺激6小時后,分別用增強型、超敏型、穩定型檢測試劑進行信號檢測。



2. 操作方便

僅需將底物和螢光素酶檢測緩沖液混合后直接加入到細胞即可。



3. 穩定性好

同時在10次反復凍融實驗中,逐典全系列報告基因檢測試劑盒顯示出較強的穩定性。




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