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一，什么是報(bào)告基因？
報(bào)告基因( reporter gene) 是一種編碼在內(nèi)源蛋白背景下易被檢測出來的蛋白質(zhì)或酶的基因。報(bào)告基因與目的基因或調(diào)控序列相連，通過間接或直接檢測報(bào)告基因編碼產(chǎn)物的信號，比如報(bào)告蛋白、mRNA、酶等，直觀反映細(xì)胞內(nèi)基因的轉(zhuǎn)錄活性或表達(dá)水平。一般報(bào)告基因的特點(diǎn)是無毒、無免疫原性、易于檢測、具有一定的特異性。報(bào)告基因編碼產(chǎn)物的半衰期是比較關(guān)注的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。編碼產(chǎn)物半衰期和報(bào)告基因的應(yīng)用領(lǐng)域息息相關(guān)。[1]
那么報(bào)告基因該如何選擇呢？在選擇報(bào)告基因時(shí)一般基于以下幾個(gè)原則，對宿主的影響，內(nèi)源性活性影響以及方法是否成熟等。目前報(bào)告基因大致分為四類[2][3]，不同的報(bào)告基因有著不同的優(yōu)缺點(diǎn)（表1）。下面就幾種不同的報(bào)告基因做出舉例介紹。
二，報(bào)告基因的種類及優(yōu)勢
| 報(bào)告基因類別 | 優(yōu)勢 |
| 無底物發(fā)射熒光(如熒光蛋白基因) | 1.相對分子質(zhì)量小、熒光較穩(wěn)定、對活細(xì)胞無害、檢測方法容易; 2.可以在同一個(gè)細(xì)胞中檢測到綠色熒光蛋白和藍(lán)色突變體 |
| 與放射性或熒光底物相互作用（如熒光素酶） | 1.方便快捷，高靈敏度; 2.線性范圍較大，背景極低，分析方法相對簡單。 |
| 轉(zhuǎn)運(yùn)為基礎(chǔ)的報(bào)告基因（如氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因） | 1.表達(dá)產(chǎn)物比較穩(wěn)定; 2.氯毒素乙酷轉(zhuǎn)移酶在真核細(xì)胞中的本底很低，結(jié)果重現(xiàn)性好，且靈敏度高，是真核基因表達(dá)調(diào)控研究中最早使用的報(bào)告基因之一。 |
| 膜錨定受體或抗體（如膜錨定熒光素酶） | 1.高靈敏度; 2.檢測信號在細(xì)胞外不受細(xì)胞內(nèi)源物質(zhì)影響。 |
熒光素酶報(bào)告基因
在生物醫(yī)藥行業(yè)最主要的報(bào)告基因?yàn)闊晒馑孛笀?bào)告基因。最常見的熒光素酶 （luciferase）基因來源于螢火蟲。螢火蟲螢光素酶在ATP、氧氣和Mg2+存在條件下，催化螢光素的氧化羧化，釋放出光信號，這是任何已知生物發(fā)光系統(tǒng)中效率較高的發(fā)光反應(yīng)，因而被設(shè)計(jì)用來檢測和定量哺乳動物細(xì)胞中螢火蟲螢光素酶的表達(dá)。相對于其他報(bào)告基因，螢光素酶具有諸多優(yōu)勢：檢測靈敏度高，型號穩(wěn)定性好，操作方便。
CHASELECTION逐典螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒旨在準(zhǔn)確、靈敏、高效地測定螢火蟲螢光素酶活性，應(yīng)用高通量藥物篩選、藥物活性檢測、大規(guī)模啟動子功能測定、信號通路等研究。
逐典螢光素酶報(bào)告基因
針對報(bào)告基因檢測不同的側(cè)重需求，逐典推出了3種檢測系統(tǒng)。
逐典螢光素酶報(bào)告基因特點(diǎn)：
1. 檢測靈敏度高，信號穩(wěn)定性好
HEK293-NFK B-LUC細(xì)胞加入梯度稀釋的TNF 在37C、5%CO條件下刺激6小時(shí)后,分別用增強(qiáng)型、超敏型、穩(wěn)定型檢測試劑進(jìn)行信號檢測。
2. 操作方便
僅需將底物和螢光素酶檢測緩沖液混合后直接加入到細(xì)胞即可。
3. 穩(wěn)定性好
同時(shí)在10次反復(fù)凍融實(shí)驗(yàn)中，逐典全系列報(bào)告基因檢測試劑盒顯示出較強(qiáng)的穩(wěn)定性。
