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介紹兩種不同的支原體檢測試劑盒

2021-10-27  閱讀(609)

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  在細胞培養,特別是傳代細胞培養中,支原體污染率達到15-35%。支原體的侵染會引起細胞功能和基因表達的嚴重改變,并造成持續危害。由于支原體污染會嚴重影響實驗結果的可靠性、重復性和一致性,對支原體的常規檢測非常重要。
  傳統的支原體檢測方法很耗費時間,通常需要一天至數周,而且操作比較繁瑣,度不高。
  中國藥典給定的支原體標準檢測方法有兩種:培養法和DNA染色法。培養法方法簡單,假陽性率低,但樣品需要量高,耗時20天左右,時間漫長。DNA染色法結果直觀,假陽性率低,但需要熒光顯微設備,實驗操作復雜。
  能否找到一種省時、省力且性高的方法檢測支原體污染呢?
  目前,市場上具有多款支原體快速檢測試劑盒,我們選取了其中兩種常見的品牌,就其檢測原理與操作進行一下比較。
  一、美國CLARKBioscience品牌一步法檢測試劑盒
  美國CLARKBioscience公司研發的一步法支原體檢測試劑盒One-stepQuickcolorMycoplasmaDetectionKit,利用等溫擴增的方法,可檢測7種常見支原體的基因。
  該檢測方法與PCR方法類似,檢測過程中,只需取少量細胞培養上清,及一個能控制溫度的水浴鍋或恒溫金屬浴,其擴增產物的顏色可通過肉眼直接觀察判斷,整個過程需要1小時左右。
  該方法對儀器的要求比較低,理論上靈敏度比較高。缺點在于檢測的支原體種類太少,目前已發現的近200種支原體,只能檢測其中的7種,檢測范圍太窄,也不符合國家藥典的規定。而且肉眼觀察結果比較主觀,如果實驗員剛好有色盲或色弱的問題,此種方法放棄。
  二、美國Lonza品牌生物發光法檢測試劑盒
  美國Lonza品牌的MycoAlertTM和升級的MycoAlertTMPLUS支原體檢測試劑盒,采用生物發光的方法,檢測支原體酶活性。其檢測的支原體酶廣泛存在于180多種支原體中,而不存在于真核細胞中。
  該方法利用支原體酶的特定活性,進行選擇性的生物化學檢測。當支原體被溶解后,釋放的酶與支原體檢測試劑盒中提供的底物發生催化反應,將ADP轉化成ATP,參與生物發光反應,并可通過分光光度計測定。如果樣品添加底物后讀數上升,表明存在支原體污染。整個實驗過程需要20分鐘左右。
  該方法能夠檢測的支原體種類比較全,檢測結果量化,容易判斷,耗時短。缺點是需要配置發光儀或多功能酶標儀,靈敏度也可能低于擴增法。

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