單細胞柔性分選系統Pala和10X Genomics聯合坐鎮單細胞核測序,用數據說話
單細胞轉錄組測序(scRNA-seq)技術作為一項革命性的生物學工具,讓人們更直觀的認識到不同的細胞亞群和狀態。但由于凍存組織無法制備高質量的細胞懸液以及細胞形狀不規則,細胞體積較大的樣本無法直接通過scRNA測序來分析。
這時,單細胞水平上的核轉錄組測序(snRNA-seq)應運而生,帶來了一種新的解決方案。單細胞核轉錄組測序就是把組織抽核,制備成單細胞核懸液進行核轉錄組測序。大大減少了樣本處理的難度,加速了人類對疾病發生發展探索的步伐。
強強聯合,助力單細胞核測序時代
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實驗步驟
1) 將新鮮冷凍的人腦組織進行解離并過濾制成核懸液。
2) 使用單細胞柔性分選系統Pala 進行核分選后,進行計數和成像以確定細胞數量和碎片清除效率。
3) 計數后的核稀釋至300,000個/ml , 每次添加600μl懸液至Pala細胞芯片中,進行大量細胞分選模式。分析并根據FSC(前向散射)/ALL(軸向光損失)和FSC/PI圖表對核進行門控,以去除雙聯體和碎片。
4) 加載到10X Genomics進行文庫制備和測序

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實驗結果
1) 對比來自解離的大腦核圖像發現,經過單細胞柔性分選系統Pala后的組織樣本成功清除了碎片。

2) Pala與標準樣本的統計數據對比,發現經過Pala分選后的細胞數量更多,每個細胞的平均讀數更低,每個樣本的總讀數更多,測序飽和度更低。

3) 從結果圖中看到,標準樣本主要由少突膠質細胞主導,而Pala測序顯示出更多的集群和更均勻的細胞類型分布。

相較于傳統核樣本準備方法,單細胞柔性分選系統Pala提供了以下優勢:
輕柔分選
<2si 的鞘液壓力,減少了對細胞的物理損傷,特別是脆弱的細胞類型,如神經細胞。
去除細胞聚集體和碎片
Pala能夠有效去除細胞聚集體和大小不一的碎片,這對于提高后續測序步驟中獲得高質量數據至關重要。
高細胞恢復率
Pala分選的樣本比標準樣本多產生了10%的細胞,這表明Pala在分選過程中能夠更有效地恢復細胞。
簡化操作流程
Pala的設置和操作相對簡單,使得用戶能夠快速上手并進行實驗,減少了因操作復雜性帶來的技術障礙。
減少實驗時間和成本
與傳統的FACS相比,Pala的簡化流程和較低的運行成本
適用于多種樣本類型
適用于多種類型的細胞和核樣本,包括那些難以通過傳統方法分離的細胞類型。
靈活分選
提供三種分選模式,包括單細胞分選,稀有細胞富集,大量細胞分選
總的來說,單細胞柔性分選平臺Pala 和 10X Genomics強強聯合,為單細胞RNA測序提供了一個高質量、高效率的樣本準備方案。
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