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單細胞分選利器 | 助力 CRISPR 基因編輯挑選最佳克隆
CRISPR/Cas9作為開創性的工具之一，可以精確和高效地修改基因組序列來研究基因功能、疾病機制和治療方法。當與iPSCs相結合時，CRISPR/Cas9通過促進iPSC基因組的精確編輯來創建疾病特異性遺傳畸變模型，從而展現出非凡的力量，這對于研究疾病機制和開創新型治療方法具有重要價值。此外，糾正iPSCs中的遺傳異常使科學家能夠生成針對特定免疫特征的定制細胞，為針對廣泛疾病的個性化細胞治療打開了可能性。
然而，盡管CRISPR技術在細胞工程中帶來了革命性的潛力，但仍存在與脫靶編輯和可變編輯效率相關的挑戰。因此，為了識別具有所需特征的克隆細胞，分離克隆群體對編輯細胞的進一步表征至關重要。單克隆篩選，確保每個被研究的線都具有異質的基因組構成，同時保持一致的生物行為。
單細胞分離儀Hana和Pala助力基因編輯后篩選最佳克隆，越來越被頂尖科學家和研究人員所認可。Hana和Pala結合創新的微流體技術、流式細胞術和液體分配技術，可在幾分鐘內將單個細胞篩選并分離到96或384孔板 中。低系統壓力(<2psi)可確保輕柔分選，并保持細胞活力和完整性。
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01.
免疫系統對細胞療法的排斥反應是細胞工程及細胞療法開發過程中至關重要的一步。本研究揭示了低免疫的誘導多能干細胞（HIP）能在具備免疫能力的同種異體恒河猴體內長期存活，大大改善了受體的糖尿病。
在基因編輯恒河猴HIP細胞過程中，通過CRISPR基因失活創建B2M-/-CIITA-/- iPSCs，有效地防止異體的適應性免疫應答和先天性免疫激活。作者采用單細胞分離儀Hana來分選出編輯成功的HIP單個細胞，并成功培養成HIP單克隆。
02.
這項研究重新審視了腺苷酸單磷酸激活的蛋白激酶（AMPK）在自噬中的作用，揭示了AMPK的雙重功能：在能量不足時調節自噬的即時誘導，同時保留重要的自噬組分。這種雙重角色對于在能量壓力下維持細胞平衡和生存至關重要。
單細胞分離儀Hana在CRISPR編輯后創建各種敲除（KO）和雙敲除（DKO）細胞系中發揮了關鍵作用。使用單細胞分離儀Hana分選GFP陽性細胞并進行單細胞克隆，建立了明確的克隆系。KO細胞系對于闡明被編輯的基因的功能起到了重要作用。
03.
非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）影響全球20-25%的人口，這一數字隨著肥胖的普遍增加而加劇，而治療方案卻很有限。利用CRISPR/Cas9工程，研究團隊在HEK293T細胞系中使用熒光素酶報告基因標記了內源性血紅素氧合酶-1（HMOX1）基因。然后單細胞分離儀Hana對經過編輯的細胞進行分選，建立單克隆體系。單克隆作為后續藥物化合物篩選的基礎模型。單細胞分離儀Hana在研究方法中發揮了關鍵作用。
04.
本文揭示了識別微管蛋白聚合抑制劑的一種新方法，利用內源性熒光標記β-微管蛋白和組蛋白H1的CRISPR - Hela細胞系來鑒定微管蛋白聚合抑制劑。使用β-微管蛋白（mCTover3）、組蛋白H1（mTagBFP2）和p62-SQSTM1（mRuby3）熒光蛋白， 用CRISPR和FAST-HDR載體系統開發HeLa細胞。
研究中采用單細胞分離儀Hana幫助作者快速、輕柔、高效地獲得活性高的CRISPR - Hela單細胞，利于單克隆培養及擴增，為后續更多實驗提供足夠的細胞工具。
05.
該研究旨在通過削弱化療耐藥性來改善癌癥治療結果。采用CRISPR編輯引入能夠使特定基因失效的突變。在實際應用中，研究團隊使用了肺癌細胞系，編輯了NRF2基因并引入了兩個突變。
通過兩輪編輯和克隆以開發所需的細胞系，單細胞分離儀Hana高效地分配了單個細胞，簡化了生成攜帶突變的肺癌細胞系的繁瑣過程。
06.
骨質疏松癥是一種普遍存在的與年齡相關的以骨密度降低為特征的骨骼疾病。盡管潛在的治療方法BMP-2和CK2.3通過BMP信號通路起作用，受限于副作用及嚴格的使用限制。借鑒一個細胞系模型，該模型通過CRISPR-Cas9使BMPR1a受體（與BMP-2相關）敲除BMPRIa 基因，這項研究成功揭示了C57BL/6（B6）小鼠品系作為骨質疏松癥研究的可靠模型。單細胞分離儀Hana將編輯后的細胞群進行分選，成為敲除細胞系的關鍵步驟，利于單克隆的后續培養和擴增。
07.
本文章主要研究HIV-1在人類巨噬細胞中的感染。引入 BLaER1 細胞作為替代髓系細胞模型，結合 CRISPR/Cas9 介導的基因編輯，對SAMHD1催化核心位點引入突變，研究SAMHD1的抗病毒功能。這種新穎的方法為制定精確靶向SAMHD1的策略鋪平了道路，而無需對其他細胞操作產生意外干擾。
這項研究創新的核心，即成功創建的敲除和敲入細胞系。Namocell單細胞分離儀進一步強調了它在推動細胞研究方法學方面的重要性。