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淺析單細胞鋪板可能會出現的問題
閱讀：934 發布時間：2021-8-26
單細胞鋪板是克隆篩選的常用方式，其中手動的有限稀釋法更是具備可操作性強，成本相對低廉等優勢，因此受到廣大用戶的青睞，長期用于克隆篩選的過程中。
手動細胞鋪板可能會出現的問題：
1、細胞計數前后出現較大誤差？
考慮細胞沉降導致懸液不勻；懸液體積過大或過小；稀釋倍數太高或太低等原因造成。
2、如何克服細胞懸液不均勻的問題？
盡量將細胞吹打為單個，防止抱團，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養基中。
3、一般加多少細胞懸液合適？
由于加入計數室的量，過少會導致計數室內出現氣泡，過多則會使得計數板上的蓋玻片不緊貼計數板，使得高度變高，體積變大；計數室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。
4、計數時，細胞稀釋倍數如何控制？
若是計數室細胞過稀或過密，會造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細胞/ml。如一般10cm皿的細胞約300-500萬個，一些細胞個體小也能達到1000-2000萬，可根據所需細胞數目取出部分作稀釋或連續稀釋后計數。舉例來說可將100ul細胞懸液加入到900ul培養基中，混勻后進行計數，計數所得乘以10即為實際細胞密度。
5、計數的原則有哪些？
計數時對壓在外圈邊線的細胞遵循“計上不計下，計左不計右"的統計學原則，遇到兩個以上的細胞組成的細胞團計為一個細胞。
因此手動有限稀釋鋪板還是會存在效率低下的問題。
Namocell單細胞分離儀為單細胞鋪板提供了更好的解決方案。一次性芯片，保證樣本之間*隔離；儀器體積小巧，可置于超凈臺中 高效分選：96孔板分選不到1min，384孔板4min以內，單克隆率超過95%輕松分選：儀器操作簡單，無需操作維護。
Namocell單細胞鋪板的原理如下：將細胞通過一次性的芯片上端加樣孔，注入到芯片腔體中。單細胞流在微流控通道中流過激光檢測區域，機器能對細胞進行識別，去除掉細胞碎片，死細胞以及狀態較差的細胞，使得終落到孔板中的細胞都具有很好的活性，能夠捕獲每一個活性細胞，形成1ul體積的液滴，輕柔地落進孔板中。整個過程對細胞的損傷可以忽略不計，所以分選得到的細胞絕大多數的細胞都能再次分裂生長。