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技術文章

時間分辨熒光免疫層析原理

閱讀:1911          發布時間:2021-6-24

熒光納米微球:

與經典的時間分辨熒光免疫分析方法DELFIA法不同,時間分辨熒光免疫層析技術采用熒光納米微球作為標記物,每個微球中可包裹成千上萬個熒光分子,大大提高了標記效率,有效的提高了靈敏度;同時納米熒光微球表面修飾有合適密度的羧基,用于與蛋白或抗體的共價偶聯,提高標記物的穩定性。

 

時間分辨熒光免疫層析原理:

當將含有待測抗原(抗體)的樣品滴在加樣區,待測樣品中的抗原(抗體)與結合墊中的熒光納米微球標記的抗體(抗原)結合并通過毛細作用向前層析,當達到檢測區后,與檢測線上固定的抗體(抗原)結合,形成微粒-抗體-抗原-抗體夾心復合物并被固定在檢測線上,而多余的熒光微球標記物繼續向前層析,與固定在質控線二抗結合。反應結束后,用紫外光源(340nm)對檢測區掃描檢測,檢測線和質控線上熒光納米微球發出高強度的熒光(615nm),且衰變時間也較長。利用延緩測量時間,待樣品基質中自然發生的短壽命熒光(1-10ns)全部衰變后,再測量稀土元素的特異性熒光,這樣就可以*排除特異本底熒光的干擾。通過檢測線和質控線熒光強度的強弱及其比值,即可分析出樣品中待測物的濃度。

 

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