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液相色譜柱的產品應用介紹
閱讀：2413 發布時間：2022-3-7
液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器。
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10um等，柱效理論值可達5～16萬／米。對于一般的分析只需5000塔板數的柱效；對于同系物分析，只要500即可；對于較難的分離物質對則可采用高達2萬的柱子，因此一般10～30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。
柱效受柱內外因素影響，為使色譜柱達到佳效率，除柱外死體積要小外，也要有合理的柱結構（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術。即使好的裝填技術，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應。這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍料徑的厚度。在一般的液相色譜系統中，柱外效應對柱效的影響遠遠大于管壁效應。
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等。
1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強，或酸性太強；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱（缺點是離子對試劑平衡時間長，對流動相pH要求比較精密，否 則很難重復實驗，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗）
3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質，且硅膠端基封尾）或一些經過修飾的C18柱（如極性嵌入技術或堿去活技術等），他們都會減少堿性化合物的拖尾，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強，或堿性太強；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測（優點是方法開發簡單，缺點是目前實 現這一技術的色譜柱品牌比較少，價格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是檢測堿性樣品的方法）選擇強離子交換柱（缺點 是不能用來分析其它樣品，對流動相pH要求比較精密，否則很難重復實驗）也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱
色譜柱的性能除了與固定相性能有關外，還與填充技術有關。在正常條件下，填料粒度>20um時，干法填充制備柱較為合適；顆粒<20um時，濕法填充較為理想。填充方法一般有四種：
①高壓勻漿法，多有用于分析柱和小規模制備柱的填充；
②徑向加壓法；
③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；
④干法，柱填充的技術性強，大多數實驗室使用己填充好的商品柱。