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劃痕實驗（細胞遷移）的實驗流程詳述
閱讀：408 發布時間：2024-8-12細胞遷移(Cell migration)：因其類似體外傷口愈合過程，又名傷口愈合實驗(Wound healing assay)，是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。它是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術。。細胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。
基本原理：在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域，稱為“劃痕/傷口"，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕/傷口"愈合，于細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像，通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值，可對細胞的遷移能力做出判斷。
條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數據的優點是，可以在恒溫箱內確定和穩定的條件下記錄傷口分析。
通常，用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經常被用作這方面的模型。蕞常用的細胞類型是角質形成細胞和成纖維細胞。
實驗前準備：
1.學習：了解實驗的目的、實驗所用試劑耗材、實驗基本操作和注意事項、結果分析等。
2.耗材：六孔板、馬克筆、直尺、200ul槍頭、PBS、wan全培養基等。
3.規劃：根據所用細胞生長速度和所需定點拍照時間提前規劃實驗。建議在做實驗之前進行一次預實驗。
實驗步驟：
1.劃線：于六孔板底面，馬克筆順直尺畫三條橫線作為標記線。
2.種板：根據分組種板，細胞密度為5x105個/孔左右。并務必鋪勻。
3.劃痕：待細胞長滿后，用直尺比著，200ul槍頭垂直于孔板和畫的標記線劃兩條垂線，使劃痕與標記線相交，可以形成若干交叉點，作為固定的檢測點。
4.清洗：棄去舊培養基，用PBS輕輕潤洗兩到三次，直到劃下來的細胞沖洗干凈。
5.加液：根據分組分別加入加藥培養基或無血清培養基。
6.拍照觀察：劃痕、清洗、加液完成后，用顯微鏡拍不同倍數的照片，作為0h對照。放入37℃，5%CO2培養箱中培養。在所需時間點取出細胞，于顯微鏡下觀察同一位置劃痕寬度并拍照。
7.數據分析：一種是統計細胞遷移的距離，一種是統計劃痕面積。都可以用ImageJ軟件來進行分析。
那么制作劃痕實驗需要注意事項：
1. 細胞的密度；劃痕實驗一般是幾種細胞的結合，但是每種細胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細胞的生長特性調整培養時間，細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好，建議是100%的鋪滿。
2. 用槍頭畫線時盡量垂直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線
3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞
4. 注意培養方式一定要改成無血清或者低血清的培養基，因為：劃痕后用無血清培養基培養細胞，意在說明在監測的 24 小時內，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到蕞低；但若細胞改成無血清培養后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。
5. （5）放入37℃ 5% CO2培養箱，培養。可按0，10，12，15時間點取樣，拍照(具體時間依實驗需要而定)。
6. （6）統計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計算細胞間距離的平均值。