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ELISA免疫分析操作要點
閱讀：128 發布時間：2024-4-22ELISA免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。
操作步驟:免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）、熒光或放射性標記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識別信號。最后利用信號強度，標準樣品濃度梯度等信息計算得出待測樣中目標抗原的濃度。
操作要點：
1、標本
對于血清標本，采集血液時需注意溶血。此外，為避免細胞裂解釋放出目標檢測分子影響實驗，檢測物宜進行離心去除細胞成份。
2、加樣
注意將所加物加至板孔底部，避免加在孔壁上部，不可濺出或產生氣泡。加不同物質時應更換槍頭，以免發生交叉污染。另外在顯色時，最好使用排槍迅速完成加液過程，以減少反應時間不一致引起的孔間差異。
3、稀釋
在稀釋過程中,要注意使用同一微量加樣器、同一類槍頭和容器,保證所稀釋液體容量一致。
4、孵育
37℃恒溫箱孵育時，酶標板應放在濕盒內,濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,最后將酶標板放在濕紗布上，并且酶標板不能疊放,以保證各板的溫度能迅速平衡。孵育時間一般為1～1.5h，不宜過長。如采用4℃孵育,則應將酶標板包好,以免試劑與外界反應或蒸發。
5、洗滌
應嚴格按要求洗滌,保證洗滌液注滿各孔,洗完板后最好在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干,并應嚴格遵守洗滌時間,不得馬虎。
6、顯色
顯色液量不可過多，加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。
7、讀板
比色前應先用潔凈的吸水紙拭干酶標板底附著的液體,以減少比色受干擾,然后
將板正確放入酶標儀的比色架中。酶標儀應安置在避光環境下,操作室溫宜在15～30℃,在使用前應先預熱酶標儀15-30分鐘,這樣測定結果更加穩定。