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  在ELISA試劑盒操作過程中總是會出現(xiàn)一些常見的問題，比如說花板、假陽性、全顯色、信號值比空白還低等等。今天進口elisa試劑盒為大家?guī)砹艘恍嶒灲?jīng)驗總結(jié)，教您這樣操作ELISA試劑盒實驗不會失敗。

   1.有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，請看以下幾個方法：
    2.親和素生物素：先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴大應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
    3.小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以 被其識別，所以保留抗原很重要，我做重組蛋白時，師兄都嚴格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。
    4.脂類物質(zhì)：可將其在有機溶劑中溶解后加入Elisa板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)天然干固在固相表面。 

5.進口elisa試劑盒應留意以下原理：因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間 的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易 吸附到固相載體表面。

    6.但選用什么，要依據(jù)試驗詳細來實踐。常用封suo劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使 用(5%－10%)；還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。封suo就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑， 從而排斥ELISA試劑盒后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封suo：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。
    7.在洗板時會有一定誤差，人為因素很大當然有前提的用洗板機除外，洗的不*或串了孔，對如斯敏捷的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。由于 聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干 擾物質(zhì)，在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。洗滌板：可以說在ELISA操縱中，洗滌是zui主要的樞紐技術(shù)。
    8.加抗體標本(和二抗)：注意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度， 太高浪費，太低則著色淺。
    9.顯色：顯色系統(tǒng)又很多，我們一開始做的時候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加 疊氮鈉。
    10.每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析。